耿榕徽 杨宇杰 胡春兰等
[摘要] 意图 评论树立紫苏叶中紫苏醛的提取和含量测定办法。 办法 以紫苏醛为目标，使用气相色谱法（GC）测定其含量。选用DM-FFAP色谱柱，初始柱温为120℃，以2℃/min升温至140℃，然后以15℃/min升温至220℃，坚持5 min。比较索氏提取、加热回流、超声提取法的差异，并优选最佳提取办法。 成果 树立了紫苏醛的含量测定办法，紫苏醛浓度在19.26～192.63 μg/ml规模内线性关系杰出，均匀收回率为101.68%，RSD=1.97%（n=6）。断定了最佳提取工艺，参加20倍量的无水乙醇溶液，在85℃水浴中回流提取1 h。 定论 本提取及含量测定办法快速简洁、成果牢靠，可为紫苏叶质量操控供给科学依据。
[关键词] 加热回流；紫苏叶；紫苏醛；气相色谱法
[中图分类号] R931.5 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2014）03（a）-0004-04
紫苏叶为唇形科植物紫苏（Perilla frutescens L.Britt.）的枯燥叶（或带嫩枝），具有解表散寒、行气和胃之成效，用于风寒伤风，咳嗽呕恶，妊娠吐逆，鱼蟹中毒[1]。紫苏叶挥发油是紫苏叶的首要活性成分，在食物工业、化妆品、医药等职业均有广泛应用[2]。其间紫苏醛为紫苏叶挥发油的首要成分[3-4]，药理试验研讨标明，紫苏醛对大鼠离体主动脉有扩血管效果[5]。紫苏醛和植物甾醇协同效果可延长小鼠的睡觉时刻而显现冷静效果[6]。紫苏醛做成肟后，甜味是砂糖的2000倍，口服能够升血糖，且效果强于紫苏油[7-8]。而紫苏醛的含量多少决议了紫苏叶的质量，紫苏醛的含量测定多经过提取挥发油的办法测定[8-10]。提取挥发油的进程耗时久，耗材也相对较大，不利于快速测定。本研讨经过加热回流法提取紫苏醛，并用气相色谱法（gas chromatography，GC）检测其间紫苏醛的含量，耗时短，耗材少，能够更简洁、方便地操控紫苏叶的质量。
1 资料与办法
1.1 仪器与资料
Agilent 7890A气相色谱仪，高速全能粉碎机（天津市泰斯特仪器有限公司），KQ-700DE型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。
紫苏醛对照品（批号：111806-201202，供含量测定用，我国食物药品检定研讨院，原我国药品生物制品检定所），紫苏叶药材（批号：Y444-120801-2、Y417-110101-7，颈复康药业集团有限公司供给），其他试剂均为剖析纯。
1.2 试验办法
1.2.1 色谱条件与体系适用性
色谱柱：DM-FFAP弹性石英毛细管柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm）；FID检测器；载气：N2；流速：1 ml/min；进样口和检测器温度：250℃；柱温：初始温度120℃，然后以2℃/min的速度升温至140℃，再以15℃/min的速度升温至220℃，坚持5 min；进样量：1 μl；分流比10∶1。别离度>1.5，理论塔板数按紫苏醛峰核算≥633 920。
1.2.2 对照品溶液的制备
取紫苏醛对照品适量，用无水乙醇稀释至6.4212 mg/ml，摇匀，备用。
1.2.3 提取条件的树立
1.2.3.1 提取办法的调查 紫苏叶药材批号：Y417-110101-7。①超声法：取3份紫苏叶粉末（过二号筛）各2 g，精细称定，置具塞锥形瓶中，参加正己烷50 ml，称重。冰水浴超声（280 kW，50 kHz），别离提取20、30、40 min，冷却并补重，微孔滤膜过滤，进样。②索氏提取法：取紫苏叶粉末（过二号筛）约4 g，精细称定，置圆底烧瓶中，参加正己烷100 ml，称重，于85℃水浴中索氏提取2 h，冷却并补重，微孔滤膜过滤，进样。③加热回流法：取紫苏叶粉末（过二号筛）约2 g，精细称定，置于锥形瓶中，参加正己烷50 ml，称重。于85℃水浴中回流2 h，冷却并补重，微孔滤膜过滤，进样。
1.2.3.2 提取溶剂的调查 取3份紫苏叶药材粉末（过二号筛）（批号：Y444-120801-2，今后均为同一批次）约2 g，精细称定，别离参加石油醚、正己烷、无水乙醇各50 ml，称重，于85℃水浴中回流2 h，冷却并补重，微孔滤膜过滤，进样。
1.2.3.3 提取时刻的调查 取3份紫苏叶药材粉末（过二号筛）约2 g，精细称定，别离参加无水乙醇50 ml，称重，于85℃水浴中别离提取1、2、3 h，冷却并补重，微孔滤膜过滤，进样。
1.2.3.4 提取温度的调查 取3份紫苏叶药材粉末（过二号筛）约2 g，精细称定，别离参加无水乙醇50 ml，称重，别离在85、90、95℃的水浴中加热回流1 h，冷却并补重，微孔滤膜过滤，进样。
1.2.3.5 溶剂用量的调查 取3份紫苏叶药材粉末（过二号筛）约2 g，精细称定，别离参加无水乙醇40、50、60 ml，称重，在85℃的水浴中加热回流1 h，冷却并补重，微孔滤膜过滤，进样。
1.2.4 含量测定办法的树立
1.2.4.1 供试品溶液的制备 取紫苏叶药材粉末（过二号筛）约2 g，精细称定，置具塞锥形瓶中，参加无水乙醇40 ml，称重，于85℃水浴中加热回流1 h，冷却并补重，微孔滤膜过滤，进样。
1.2.4.2 线性规模 精细量取紫苏醛对照品溶液0.15、0.25、0.4、0.8、1.2、1.5 ml于5 ml容量瓶中，用无水乙醇定容成6个不同浓度的对照品溶液，按本文色谱条件测定。
1.2.4.3 精细度试验 取同一对照品溶液，按本文色谱条件，接连进样6次，记载紫苏醛的峰面积。
1.2.4.4 重复性试验 取紫苏叶药材粉末6份，按“1.2.4.1”项下操作，按本文色谱条件测定。
1.2.4.5 稳定性试验 取供试品溶液，别离于制造后0、2、4、6、23 h，按本文色谱条件测定。
1.2.4.6 收回率试验 选用加样收回法。取紫苏叶粉末1 g，精细称定，精细参加对照品溶液各1.3 ml（6.4212 mg/ml），共6份。精细参加无水乙醇40 ml，称重，于85℃水浴中加热回流提取1 h，冷却并补重，微孔滤膜过滤，进样。
1.2.4.7 样品的测定 购买承德市6家不同药店的紫苏叶药材，依照“1.2.4.1”项下制备供试品溶液，别离进样测定其间紫苏醛含量。
1.2.4.8 提取办法比较 用上述最佳提取办法和水蒸气蒸馏法（2010年版我国药典一部）提取挥发油，比较两者中紫苏醛的含量。
2 成果
2.1 提取条件的调查成果
2.1.1 提取办法的调查成果
超声法提取20、30、40 min紫苏醛含量别离为285.10 mg/100 g、320.60 mg/100 g、317.70 mg/100 g，索氏提取2 h紫苏醛含量为360.60 mg/100 g，加热回流提取2 h的紫苏醛含量为389.30 mg/100 g，可见加热回流法较优。
2.1.2 提取溶剂的调查成果
无水乙醇、石油醚和正己烷的紫苏醛含量别离为311.60 mg/100 g、242.05 mg/100 g、255.00 mg/100 g，可见无水乙醇的提取功率较高。
2.1.3 提取时刻的调查成果
提取1、2、3 h的紫苏醛含量别离为292.15 mg/100 g、290.05 mg/100 g、291.60 mg/100 g，三者差异忽略不计，可见提取1 h功率较高。
2.1.4 提取温度的调查成果
提取温度为85、90、95℃的紫苏醛含量别离为275.00 mg/100 g、277.75 mg/100 g、276.00 mg/100 g，三者差异忽略不计，可见提取温度为85℃的提取功率较高。
2.1.5 溶剂用量的调查成果
无水乙醇用量40、50、60 ml提取紫苏醛的含量别离为188.30 mg/100 g、191.25 mg/100 g、184.05 mg/100 g，三者差异≤1.6%可忽略不计，可见40 ml的提取功率较高。
综上所述，经过单要素循环法对提取办法、提取溶剂、提取时刻及提取温度、溶剂用量的调查，断定最佳提取工艺为加20倍的无水乙醇，于85℃水浴中加热回流1 h。
2.2 含量测定办法的调查成果
2.2.1 线性调查成果
以浓度（mg/ml）为横坐标，对照品峰面积为纵坐标，制作规范曲线得到回归方程：Y=0.7882X+0.0012，浓度在19.26～192.63 μg/ml规模内线性关系杰出（r=0.9999，n=6）。
2.2.2 精细度调查成果
接连进样6次，紫苏醛峰面积RSD=0.97%，标明仪器精细度杰出。
2.2.3 重复性调查成果
紫苏醛的均匀含量为259.6 mg/100 g，RSD=1.3%，标明重复性杰出。
2.2.4 稳定性调查成果
紫苏醛峰面积RSD=0.77%，成果标明供试品溶液在23 h内稳定性杰出。
2.2.5 收回率调查成果
加样收回率成果详细见表1。成果显现，均匀收回率为101.68%，RSD=1.97%。
2.2.7 提取办法比较成果
使用本研讨最佳提取办法提取出的紫苏醛含量为262.11 mg/100 g，水蒸气蒸馏法提取的挥发油中紫苏醛含量为297.46 mg/100 g，前者占后者的88.12%，标明该办法的提取功率很高。
3 评论
本研讨选用加热回流法提取紫苏叶中的紫苏醛，并用GC检测其含量。有文献报导，经过提取紫苏叶中挥发油再测定其间紫苏醛含量。在提取器中加石油醚，加热时刻为4 h，放冷汲取石油醚层，并用石油醚层洗刷提取器上壁3～4次，兼并洗刷液，于25℃下减压蒸干，残渣加乙酸乙酯搬运至容量瓶[10]。现行2010年版药典挥发油的提取时刻为2.5 h。还有超临界CO2萃取挥发油[11]。本办法加20倍的无水乙醇，于85℃水浴中加热回流1 h，提取时刻更短，操作更简洁，耗材少，更经济。
经过对多家药店的药材检测，发现其间的紫苏醛含量各异，可能是药材质量不同，也可能是药材寄存不妥导致含量丢失，有必要为市售紫苏叶药材树立一种质量监控手法。
紫苏叶广泛应用在药品、食物中，含有紫苏叶精油的产品在商场中也层出不穷[12-13]。鉴于紫苏叶中的多种生物学成效以及特别的优秀性质，以其为质料开发出产出来的产品深受消费者的喜爱，具有宽广的发展前景[14-16]。因而，对紫苏叶中的紫苏醛进行质量监控很有必要。
本办法也能够为同类药材的提取、含量测定供给学习。
紫苏叶挥发油中的紫苏醛含量高于本办法从药材中提取的紫苏醛含量，可能是药材中的紫苏醛未提取彻底，不能体现出紫苏醛在药材植物中的切当含量；也可能由于紫苏醛作为一种活性物质，在提取进程中可能会呈现转化，从其他物质转化为紫苏醛或许从紫苏醛转化成其他物质，这其间的详细搬运进程还需进一步研讨。
[参考文献]
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典一部[M].北京：我国医药科技出版社，2010：217-218.
[2] 伍永富，秦少容，刘世琪.紫苏叶油的研讨进展[J].时珍国医国药，2007，18（8）：2019-2020.
