吴华++++唐群+++++瞿志雄+++++王健++++王兴华
[摘要] 意图 评论5-羟色胺和5-羟色胺转运体在青壮年猝死综合征脑安排的表达及其含义。 办法 运用免疫安排化学S-P法检测10例正常脑安排和8例青壮年猝死综合征脑安排中5-羟色胺和5-羟色胺转运体的表达水平，使用图画剖析技能丈量阳性细胞的均匀光密度值。 成果 青壮年猝死征死者脑干中缝背核5-羟色胺的均匀光密度值低于正常脑安排，而5-羟色胺转运体的均匀光密度值高于正常脑安排，差异均有统计学含义（P＜0.05）。定论 5-羟色胺及5-羟色胺转运体的改变参加青壮年猝死综合征的发病进程，可作为确诊青壮年猝死综合征的参阅目标。
[关键词] 法医病理学；青壮年猝死综合征；5-羟色胺；5-羟色胺转运体；免疫组化
[中图分类号] RF795.1[文献标识码] B[文章编号] 1673-9701（2014）15-0061-02
Immunohistochemical study on SMDS dorsal nucleus raphe 5-serotonin and 5-serotonin transporter
WU Hua1 TANG Qun2 QU Zhixiong1WANG Jian1 WANG Xinghua1
1.Furong Judicial Identification Center of the Second People's Hospital of Hunan Province, Changsha 410007,China；2. Department of Pathology of Hunan University of Chinese Medicine, Changsha 410208, China
[Abstract] Objective To investigate the 5- serotonin and 5-serotonin transporter expression and significance in brain tissue of sudden manhood death syndrome. Methods Used immunohistochemical S-P staining method in 10 cases of normal brain tissues and 8 cases of sudden manhood death syndrome in expression of 5-HT and 5-serotonin transporter in the brain tissue, using image analysis technique to measure the mean optical density of positive cells of value. Results The average optical density of the 5- serotonin in the dorsal nucleus raphe of sudden manhood death syndrome was lower than that in normal brain tissue, and the average optical density of 5-serotonin transporter was higher than that in normal brain tissue, the differences were statistically significant(P < 0.05). Conclusion The changes of 5- HT and 5- serotonin transporter were involved in the pathogenesis of sudden manhood death syndrome, which can be used as a reference marker for diagnosis of sudden manhood death syndrome.
[Key words] Forensic pathology; Sudden manhood death syndrome; 5-serotonin; 5-serotonin transporter; Immunohistochemistry本试验经过调查青壮年猝死征（sudden manhood death syndrome ，SMDS）死者脑干中缝背核中5-羟色胺（5-ydroxytryptamine，5-HT）及5-羟色胺转运体（5-HT transporter，5-HTT/ serotonin transporter，SERT）的表达改变，评论5-HT、SERT与SMDS之间的联系，以期为SMDS的死因剖析研讨供给试验根据。
1 资料与办法
1.1 样本与首要试剂、仪器
18例脑安排标本来源于湖南省第二公民医院芙蓉司法判定中心和湖南中医药大学病理教研室。其间青壮年猝死综合征8例（SMDS组），尸身查验及安排学查看未见显着反常，毒物剖析阴性；正常脑安排10例（正常对照组），均死于交通事故颅脑损害，生前无脑部疾患。首要试剂与仪器：兔抗人5-HT、5-HTT多克隆抗体、通用型S-P免疫安排化学试剂盒和DAB显色试剂盒（福建迈新生物科技开发公司），显微图画剖析体系（北京麦克奥迪公司）。
1.2 选材
18例脑安排标本每例取脑干中缝背核，10%福尔马林固定，惯例脱水，白腊包埋，4 μm厚接连切片，进行5-HT及5-HTT免疫组化染色。
1.3 免疫组化染色
按S-P免疫安排化学试剂盒阐明书进行操作。5-HT、5-HTT一抗作业浓度分别为1∶200和1∶100，用PBS替代一抗作阴性对照。显微镜下调查细胞染色状况，胞浆和胞膜染成黄色，含有粗细纷歧的棕黄色颗粒即为阳性细胞，苏木素轻度复染细胞核。
1.4 图画剖析
Olympus显微镜调查每张切片，并随机选取5个视界，用麦克奥迪显微图画剖析体系对5-HT、SERT的表达进行定量丈量，丈量免疫组化阳性细胞的均匀光密度值。
1.5 统计学处理
选用SPSS19.0统计学软件，计量数据以均数±标准差（x±s）表明，组间差异比较选用t查验， P < 0.05为有统计学含义。
2 成果
2.1 5-HT免疫组化染色成果
镜下调查5-HT的表达状况，正常对照组脑干中缝背核5-HT呈高度表达，被染成棕褐色，而SMDS组5-HT呈低度表达，被染成淡黄色。SMDS组5-HT的均匀光密度值（0.185±0.055），低于正常对照组（0.394±0.098），差异有统计学含义（P<0.05），阐明青壮年猝死综合征脑内5-HT在脑内中缝背核的表达显着低于正常组。见表1。
2.2 5-HTT免疫组化染色成果
镜下调查5-HTT的表达状况，正常对照组脑干中缝背核5-HTT呈中度表达，被染成棕黄色，而SMDS组5-HTT呈高度表达，被染成棕褐色。SMDS组5-HTT的均匀光密度值（0.368±0.086）高于正常对照组（0.225±0.089），差异有统计学含义（P<0.05），阐明青壮年猝死综合征脑内5-HTT在脑内中缝背核的表达显着高于正常组。见表1。
表1 5-HT、5-HTT在两组脑干中缝背核均匀光密度值的改变
注：与正常对照组比较具有统计学含义（P ＜0.05）
3 评论
SMDS是一种原因未明的猝死，具有死于睡觉中、多为青壮年、绝大多数为男性、生前多身体健康、逝世敏捷、尸身剖验不能发现足以阐明其死因的病理改变等特色[1]。现在，关于此类判定通常是在扫除暴力、中毒和器质性疾病等死因后做出估测性定论[2]。因为死因不明，缺少切当的确诊根据，易引起纠纷诉讼，而从分子生物学方面进行研讨，可望有所突破。
5-HT最早是从血清中发现的，又叫血清素（serotonin），是中枢神经体系中的一种重要的神经递质[3]，其与呼吸、心血管体系、心情、睡觉、感觉、体温调理、内分泌功用及神经的发育调理都有密切联系[4]。中枢神经体系5-HT能神经元首要散布于脑干中缝核区和旁正中区，这些神经元一起组成了脑干血清素体系[5]，其神经纤维广泛地延伸到脑干的自主神经核、呼吸神经核及脊髓中，帮忙调理机体功用。SMDS多发作在睡觉进程中，因而估测其发病进程可能与中枢神经递质5-HT的含量及功用反常有关。Portas等[6]研讨发现，中缝背核的5-HT能神经元电活动和5-HT能神经纤维的投射区域5-HT的释放量在睡觉期削减，在觉悟期添加，中缝背核的5-HT神经元参加睡觉调理，振奋5-HT神经元使睡觉削减，按捺则促进睡觉，显现5-HT有促觉悟效果。香松林等[7]进步脑脊液5-羟色胺浓度可改进大鼠中枢性睡觉呼吸暂停。Klintschar以为，5-HT相关基因反常可能是婴儿猝死综合征的发病机制[8]。本试验成果显现，SMDS组5-HT在脑干中缝背核的表达较正常对照组削弱，提示中枢神经递质，5-HT的含量下降可能导致，SMDS患者睡觉反常，促发睡觉呼吸暂停导致青壮年猝死的发作。5-HTT是一种对5-HT有高度亲和力的跨膜转运蛋白，广泛存在于大脑边缘体系和5-羟色胺能神经突触前膜上。5-HTT从神经突触空隙中再吸取5-HT进入突触前神经元，使其灭活，然后使突触空隙的5-HT水平下降[9]。因而，5-HTT从突触空隙中再吸取5-HT而对突触后受体介导信号的量和效果持续时间产生影响，然后在5-羟色胺神经传递的微调中起关键效果。本试验成果显现，SMDS组5-HTT在脑干中缝背核的表达较正常对照组增强，提示5-HTT从突触空隙中再吸取5-HT添加，进一步导致突触空隙的5-HT水平下降，后者可影响上气道扩张肌的张力，引起患者上气道陷落，然后引起患者窒息，促进SMDS的发作。
SMDS的死因与机制尚不非常清楚，至今有心脏性猝死、呼吸性猝死、机械影响、噩梦、内分泌等多种学说。本研讨成果提示，5-HT、5-HTT可作为确诊SMDS的参阅目标。一起，估测SMDS死者中缝背核5-HT表达下降、5-HTT表达增强是其死前伴嗟叹、呼吸困难、呼之不该的安排学根底。
[参阅文献]
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（收稿日期：2014-01-17）
