赵乐+杨国栋
[摘要] 意图 检测卵巢癌安排中microRNA-21基因的表达，并评论其与临床病理要素间的联系。 办法 选用实时定量PCR办法检测64例卵巢癌安排和30例正常卵巢安排中microRNA-21的相对表达量，并剖析microRNA-21的表达量在不同临床病理要素间的差异。 成果 在正常卵巢安排、卵巢癌安排中microRNA-21的相对表达量分别为4.23±1.02、7.64±0.87，其差异具有统计学含义（P<0.05）；无淋巴结搬运组与有淋巴搬运组的相对表达量分别为4.99±1.02，7.24±0.91，其差异有统计学含义（P<0.05）；临床分期为0～Ⅱ期及Ⅲ～Ⅳ期的卵巢癌安排中microRNA-21的相对表达量分别为4.42±0.82、7.75±1.13，其差异有统计学含义（P<0.05），但microRNA-21在卵巢癌安排中的表达与患者年纪、临床病理分型无关，其差异无统计学含义（P>0.05）。 定论 microRNA-21的表达量在卵巢癌安排中较正常卵巢安排显着添加，其反常高表达可能与卵巢癌的发作、开展有关。
[关键词] MicroRNA-21；卵巢癌；qRT-PCR
[中图分类号] R737.31[文献标识码] A[文章编号] 1674-4721（2014）05（b）-0050-03
Expression of MicroRNA-21 in ovarian cancer and its relationship with clinical pathological factors
ZHAO Le1 YANG Guo-dong2
1.Department of Clinical Laboratory,the First Hospital Affiliated to Henan University of Science and Technology,Luoyang 471003,China;2.Department of Vascular Surgery,the First Hospital Affiliated to Henan University of Science and Technology,Luoyang 471003,China
[Abstract] Objective To detect the expression of microRNA-21 gene in ovarian cancer issue,and to explore its relationship with clinical pathological factors. Methods The relative expression amount of microRNA-21 of ovarian cancer tissue in 64 cases and normal ovarian tissue in 30 cases was detected by quantitative real-time PCR,and the difference of the expression amount of microRNA-21 in different clinical pathological factors. Results The relative expression amount of MicroR-21 in normal ovarian tissue and ovarian cancer tissue was 4.23±1.02 and 7.64±0.87 respectively,and there was a statistical difference between the two (P＜0.05);the relative expression amount of the ymph node metastasis group and the lymph node metastasis group was 7.24±0.91 and 4.99±1.02 respectively,and there was a statistical difference between the two groups (P＜0.05);the relative expression amount of microRNA-21 of ovarian cancer tissue 0-Ⅱstage and Ⅲ-Ⅳ stage of clinical stage was4.42±0.82, 7.75±1.13 respectively,and there was a statistical difference between the two(P<0.05).However,microRNA-21 expression was not significantly correlated with the patients′ age and pathological types (P>0.05). Conclusion The expression of microRNA-21 is higher in ovarian cancer tissue compared to normal ovarian tissue,the abnomal high expression of microRNA-21 may be associated with carcinogenesis and development of ovarian cancer.
[Key words] MicroRNA-21;Ovarian cancer;Quantitative real-time PCR
卵巢癌是严重威胁我国妇女健康的恶性肿瘤之一，其发病率呈逐年上升趋势。细小RNA（microRNAs）是一类内源性的小分子RNA，在高级生物的成长发育进程中起重要的调节效果。microRNA-21是miRNAs中的一员，现阶段研讨显现，microRNA-21在人类多种肿瘤中呈高表达，并参加了细胞的增殖、分解及凋亡进程，且与肿瘤的成长、侵袭、搬运等密切相关，可是，microRNA-21在卵巢癌中的表达状况报导很少，本试验拟经过检测microRNA-21在卵巢正常安排及卵巢癌安排中的表达状况，评论microRNA-21在卵巢癌发作、开展进程中的效果，以期有助于卵巢癌发作机制的研讨。
1 材料与办法
1.1一般材料
搜集河南科技大学榜首隶属医院2012年10月~2013年11月手术切除的卵巢癌新鲜安排标本64例，年纪45～62岁，中位年纪52.3岁。临床分期0～Ⅱ期45例，Ⅲ～Ⅳ期19例；有淋巴搬运者39例，无淋巴搬运者25例。一起搜集同一患者远端正常卵巢安排30例，均经病理证明，且患者术前未接受过放化疗。一切标本在离体0.5 h内敏捷保存于液氮中备用。
1.2 首要试剂及仪器
DNA marker、RNA提取试剂盒、PCR扩增试剂盒（日本TaKaRa公司），GS-15R台式低温高速离心机（美国Beckman公司），PCR扩增仪（德国Biometra公司），Light cycler1.5荧光定量PCR仪（瑞士罗氏公司）。
1.3 引物规划
microRNA-21引物序列，上游：5′-GCCCGCTAGCTTATCAGACTGATG-3′；下流，5′-GTGCAGGGTCCGAGGT-3′。内参为U6引物序列，上游： 5′-GCTTCGGCAGCACATATACT-AAAAT-3′；下流：5′-CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT-3′。以上引物均由上海生工公司组成。
1.4 卵巢安排microRNA-21的提取及qRT-PCR
严厉依照RNA提取试剂盒的操作阐明提取总RNA，用紫外分光光度计丈量RNA A值，选取A 260 nm/280 nm比值在1.8~2.0的样本进行进行逆转录反响，组成cDNA。以cDNA为模板，严厉依照qRT-PCR试剂盒阐明书进行操作，反响参数为94℃ 4 min；94℃ 30 s，62℃ 30 s，40个循环。
1.5 统计学处理
数据选用SPSS 18.0进行统计剖析，计量材料用均数±标准差（x±s）表明，选用t查验，以P＜0.05为差异有统计学含义。
2 成果
2.1 microRNA-21在正常卵巢安排及卵巢癌中相对表达量的比较
正常卵巢安排中microRNA-21的相对表达量为4.23±1.02，显着低于卵巢癌安排的7.64±0.87（t=2.306，P<0.05）。
2.2 microRNA-21的表达与临床病理要素间的联系
临床分期0～Ⅱ期及Ⅲ～Ⅳ期的卵巢癌安排中microRNA-21的相对表达量分别为4.42±0.82、7.75±1.13，其差异有统计学含义（t=1.962，P<0.05）；无淋巴结搬运组与有淋巴搬运组的相对表达量分别为4.99±1.02、7.24±0.91，其差异有统计学含义（t=1.648，P<0.05）；但microRNA-21在卵巢癌安排中的表达与患者的年纪、临床病理分型无关，其差异无统计学含义（P>0.05）（表1）。
表1 卵巢癌安排中microRNA-21的表达与临床病理要素间的联系
3 评论
miRNA是由19～22个核苷酸组成的一类单链非编码RNA，经过与mRNA的3′端结合，降解或按捺mRNA的翻译，可调控人体大约30%的mRNA[1]。近年来的重多研讨发现，miRNA可经过与mRNA的效果，在肿瘤的发作、开展进程中发挥重要效果，参加肿瘤细胞的增殖、分解、凋亡、搬运等进程[2-3]。Lagos-Quintana等[4]于2001年证明，在脊椎动物和非脊椎动物中存在类似于Lin-4和Let-7的miRNA，其间一种即为microRNA-21，microRNA-21坐落染色体17q23.2 FRA17B的脆性区域，其含有22个核苷酸。很多的文献报导证明，microRNA-21是一种癌基因，经过调控NFIB、PDCD4、PTEN、SPRY2等抑癌基因，在多种肿瘤安排中呈反常高表达[5-7]。本试验经过qRT-PCR的办法检测了microRNA-21在正常卵巢安排及卵巢癌安排中的相对表达量，研讨发现，在正常卵巢安排中的microRNA-21的相对表达量为0.237±0.021，显着低于卵巢癌安排中的0.646±0.027（P<0.05），由此能够估测microRNA-21可能在卵巢癌的发作、开展进程中起推进效果，microRNA-21的激活可能导致卵巢癌的发作、开展，这与microRNA-21在其他肿瘤安排中的研讨成果类似。Schetter等[8-10]研讨发现 microRNA-21在结直肠癌中的表达显着高于其附近正常安排。Matsushima等[11]在食管癌中的研讨发现，食管癌安排中的microRNA-21的表达均较正常安排显着上调，且鳞癌安排中microRNA-21的表达量升高与预后不良有显着联系。进一步研讨发现，microRNA-21的表达量与患者的年纪、病理学分型无关（P＞0.05），但随着肿瘤分解程度的下降及淋巴结的搬运，microRNA-21的表达量显着升高，提示microRNA-21可能在卵巢癌肿瘤细胞的滋润及搬运进程中发挥必定的效果，并在必定程度上调控卵巢癌细胞的行为。
综上所述，本试验证明了microRNA-21在卵巢癌安排中呈反常高表达，这一发现可能对卵巢癌的医治和预后具有重要含义，但现在对microRNA-21转录调控的效果机制尚不清晰，需要进行后续研讨。
[参考文献]
[1]Wu Y，Fu X，Zhu X，et al.Prognostic role of systemic inflammatory response in renal cell carcinoma:a systematic review and meta-analysis[J].J Cancer Res Clin Oncol，2011， 137（5）：887-896.
[2]Wang B，Zhang Q.The expression and clinical significance of circulating microRNA-21 in serum of five solid tumors[J].J Cancer Res Clin Oncol，2012，138（10）：1659-1666．
[3]Liu M， Tang Q， Qiu M， et al.MiR-21 targets the tumor suppressor RhoB and regulates proliferation,invasion and apoptosis in colorectal cancer cells[J].FEBS Lett，2011，585（19）：2998-3005.
[4]Lagos-Quintana M，Rauhut R，Lendeckel W，et al.Identification of novel genes coding for small expressed RNAs[J]. Science，2001，294（5543）：853-858.
[5]Iliopoulos D，Jaeger SA，Hirsch HA，et al.STAT3 activation of miR-21 and miR-181b-1 via PTEN and CYLD are part of the epigenetic switch linking inflammation to cancer[J].Mol Cell，2010，39（4）：493-506.
[6]Yang CH，Yue J，Fan M，et al.IFN induces miR-21 through a signal transducer and activator of transcription 3-dependent pathway as a suppressive negative feedback on IFN-induced apoptosis[J].Cancer Res，2010，70（20）：8108-8116.
[7]Braun J，Hoang-Vu C，Dralle H，et al.Downregulation of microRNAs directs the EMT and invasive potential of anaplastic thyroid carcinomas[J].Oncogene，2010，29（29）：4237-4244.
[8]Schetter AJ，Leung SY，Sohn JJ，et al.MicroRNA expression profiles associated with prognosis and therapeutic outcome in colon adenocarcinoma[J].JAMA，2008，299（4）：425-436.
[9]Chang KH，Miller N，Kheirelseid EA，et al.MicroRNA-21 and PDCD4 expression in colorectal cancer[J].Eur J Surg Oncol，2011，37（7）：597-603.
[10]Ma Y，Zhang P，Yang J，et al.Candidate microRNA biomarkers in human colorectal cancer:systematic review profiling studies and experimental validation[J].Int J Cancer，2012，130（9）：2077-2087.
[11]Matsushima L，Isomoto H，Kohno S，et al.MicroRNAs and esophageal squamous cell carcinoma[J].Digestion，2010， 82（3）：138-144.
（收稿日期：2014-04-01本文修改：许俊琴）
1.3 引物规划
microRNA-21引物序列，上游：5′-GCCCGCTAGCTTATCAGACTGATG-3′；下流，5′-GTGCAGGGTCCGAGGT-3′。内参为U6引物序列，上游： 5′-GCTTCGGCAGCACATATACT-AAAAT-3′；下流：5′-CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT-3′。以上引物均由上海生工公司组成。
1.4 卵巢安排microRNA-21的提取及qRT-PCR
严厉依照RNA提取试剂盒的操作阐明提取总RNA，用紫外分光光度计丈量RNA A值，选取A 260 nm/280 nm比值在1.8~2.0的样本进行进行逆转录反响，组成cDNA。以cDNA为模板，严厉依照qRT-PCR试剂盒阐明书进行操作，反响参数为94℃ 4 min；94℃ 30 s，62℃ 30 s，40个循环。
1.5 统计学处理
数据选用SPSS 18.0进行统计剖析，计量材料用均数±标准差（x±s）表明，选用t查验，以P＜0.05为差异有统计学含义。
2 成果
2.1 microRNA-21在正常卵巢安排及卵巢癌中相对表达量的比较
正常卵巢安排中microRNA-21的相对表达量为4.23±1.02，显着低于卵巢癌安排的7.64±0.87（t=2.306，P<0.05）。
2.2 microRNA-21的表达与临床病理要素间的联系
临床分期0～Ⅱ期及Ⅲ～Ⅳ期的卵巢癌安排中microRNA-21的相对表达量分别为4.42±0.82、7.75±1.13，其差异有统计学含义（t=1.962，P<0.05）；无淋巴结搬运组与有淋巴搬运组的相对表达量分别为4.99±1.02、7.24±0.91，其差异有统计学含义（t=1.648，P<0.05）；但microRNA-21在卵巢癌安排中的表达与患者的年纪、临床病理分型无关，其差异无统计学含义（P>0.05）（表1）。
表1 卵巢癌安排中microRNA-21的表达与临床病理要素间的联系
3 评论
miRNA是由19～22个核苷酸组成的一类单链非编码RNA，经过与mRNA的3′端结合，降解或按捺mRNA的翻译，可调控人体大约30%的mRNA[1]。近年来的重多研讨发现，miRNA可经过与mRNA的效果，在肿瘤的发作、开展进程中发挥重要效果，参加肿瘤细胞的增殖、分解、凋亡、搬运等进程[2-3]。Lagos-Quintana等[4]于2001年证明，在脊椎动物和非脊椎动物中存在类似于Lin-4和Let-7的miRNA，其间一种即为microRNA-21，microRNA-21坐落染色体17q23.2 FRA17B的脆性区域，其含有22个核苷酸。很多的文献报导证明，microRNA-21是一种癌基因，经过调控NFIB、PDCD4、PTEN、SPRY2等抑癌基因，在多种肿瘤安排中呈反常高表达[5-7]。本试验经过qRT-PCR的办法检测了microRNA-21在正常卵巢安排及卵巢癌安排中的相对表达量，研讨发现，在正常卵巢安排中的microRNA-21的相对表达量为0.237±0.021，显着低于卵巢癌安排中的0.646±0.027（P<0.05），由此能够估测microRNA-21可能在卵巢癌的发作、开展进程中起推进效果，microRNA-21的激活可能导致卵巢癌的发作、开展，这与microRNA-21在其他肿瘤安排中的研讨成果类似。Schetter等[8-10]研讨发现 microRNA-21在结直肠癌中的表达显着高于其附近正常安排。Matsushima等[11]在食管癌中的研讨发现，食管癌安排中的microRNA-21的表达均较正常安排显着上调，且鳞癌安排中microRNA-21的表达量升高与预后不良有显着联系。进一步研讨发现，microRNA-21的表达量与患者的年纪、病理学分型无关（P＞0.05），但随着肿瘤分解程度的下降及淋巴结的搬运，microRNA-21的表达量显着升高，提示microRNA-21可能在卵巢癌肿瘤细胞的滋润及搬运进程中发挥必定的效果，并在必定程度上调控卵巢癌细胞的行为。
综上所述，本试验证明了microRNA-21在卵巢癌安排中呈反常高表达，这一发现可能对卵巢癌的医治和预后具有重要含义，但现在对microRNA-21转录调控的效果机制尚不清晰，需要进行后续研讨。
[参考文献]
[1]Wu Y，Fu X，Zhu X，et al.Prognostic role of systemic inflammatory response in renal cell carcinoma:a systematic review and meta-analysis[J].J Cancer Res Clin Oncol，2011， 137（5）：887-896.
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[4]Lagos-Quintana M，Rauhut R，Lendeckel W，et al.Identification of novel genes coding for small expressed RNAs[J]. Science，2001，294（5543）：853-858.
[5]Iliopoulos D，Jaeger SA，Hirsch HA，et al.STAT3 activation of miR-21 and miR-181b-1 via PTEN and CYLD are part of the epigenetic switch linking inflammation to cancer[J].Mol Cell，2010，39（4）：493-506.
[6]Yang CH，Yue J，Fan M，et al.IFN induces miR-21 through a signal transducer and activator of transcription 3-dependent pathway as a suppressive negative feedback on IFN-induced apoptosis[J].Cancer Res，2010，70（20）：8108-8116.
[7]Braun J，Hoang-Vu C，Dralle H，et al.Downregulation of microRNAs directs the EMT and invasive potential of anaplastic thyroid carcinomas[J].Oncogene，2010，29（29）：4237-4244.
[8]Schetter AJ，Leung SY，Sohn JJ，et al.MicroRNA expression profiles associated with prognosis and therapeutic outcome in colon adenocarcinoma[J].JAMA，2008，299（4）：425-436.
[9]Chang KH，Miller N，Kheirelseid EA，et al.MicroRNA-21 and PDCD4 expression in colorectal cancer[J].Eur J Surg Oncol，2011，37（7）：597-603.
[10]Ma Y，Zhang P，Yang J，et al.Candidate microRNA biomarkers in human colorectal cancer:systematic review profiling studies and experimental validation[J].Int J Cancer，2012，130（9）：2077-2087.
[11]Matsushima L，Isomoto H，Kohno S，et al.MicroRNAs and esophageal squamous cell carcinoma[J].Digestion，2010， 82（3）：138-144.
（收稿日期：2014-04-01本文修改：许俊琴）
1.3 引物规划
microRNA-21引物序列，上游：5′-GCCCGCTAGCTTATCAGACTGATG-3′；下流，5′-GTGCAGGGTCCGAGGT-3′。内参为U6引物序列，上游： 5′-GCTTCGGCAGCACATATACT-AAAAT-3′；下流：5′-CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT-3′。以上引物均由上海生工公司组成。
1.4 卵巢安排microRNA-21的提取及qRT-PCR
严厉依照RNA提取试剂盒的操作阐明提取总RNA，用紫外分光光度计丈量RNA A值，选取A 260 nm/280 nm比值在1.8~2.0的样本进行进行逆转录反响，组成cDNA。以cDNA为模板，严厉依照qRT-PCR试剂盒阐明书进行操作，反响参数为94℃ 4 min；94℃ 30 s，62℃ 30 s，40个循环。
1.5 统计学处理
数据选用SPSS 18.0进行统计剖析，计量材料用均数±标准差（x±s）表明，选用t查验，以P＜0.05为差异有统计学含义。
2 成果
2.1 microRNA-21在正常卵巢安排及卵巢癌中相对表达量的比较
正常卵巢安排中microRNA-21的相对表达量为4.23±1.02，显着低于卵巢癌安排的7.64±0.87（t=2.306，P<0.05）。
2.2 microRNA-21的表达与临床病理要素间的联系
临床分期0～Ⅱ期及Ⅲ～Ⅳ期的卵巢癌安排中microRNA-21的相对表达量分别为4.42±0.82、7.75±1.13，其差异有统计学含义（t=1.962，P<0.05）；无淋巴结搬运组与有淋巴搬运组的相对表达量分别为4.99±1.02、7.24±0.91，其差异有统计学含义（t=1.648，P<0.05）；但microRNA-21在卵巢癌安排中的表达与患者的年纪、临床病理分型无关，其差异无统计学含义（P>0.05）（表1）。
表1 卵巢癌安排中microRNA-21的表达与临床病理要素间的联系
3 评论
miRNA是由19～22个核苷酸组成的一类单链非编码RNA，经过与mRNA的3′端结合，降解或按捺mRNA的翻译，可调控人体大约30%的mRNA[1]。近年来的重多研讨发现，miRNA可经过与mRNA的效果，在肿瘤的发作、开展进程中发挥重要效果，参加肿瘤细胞的增殖、分解、凋亡、搬运等进程[2-3]。Lagos-Quintana等[4]于2001年证明，在脊椎动物和非脊椎动物中存在类似于Lin-4和Let-7的miRNA，其间一种即为microRNA-21，microRNA-21坐落染色体17q23.2 FRA17B的脆性区域，其含有22个核苷酸。很多的文献报导证明，microRNA-21是一种癌基因，经过调控NFIB、PDCD4、PTEN、SPRY2等抑癌基因，在多种肿瘤安排中呈反常高表达[5-7]。本试验经过qRT-PCR的办法检测了microRNA-21在正常卵巢安排及卵巢癌安排中的相对表达量，研讨发现，在正常卵巢安排中的microRNA-21的相对表达量为0.237±0.021，显着低于卵巢癌安排中的0.646±0.027（P<0.05），由此能够估测microRNA-21可能在卵巢癌的发作、开展进程中起推进效果，microRNA-21的激活可能导致卵巢癌的发作、开展，这与microRNA-21在其他肿瘤安排中的研讨成果类似。Schetter等[8-10]研讨发现 microRNA-21在结直肠癌中的表达显着高于其附近正常安排。Matsushima等[11]在食管癌中的研讨发现，食管癌安排中的microRNA-21的表达均较正常安排显着上调，且鳞癌安排中microRNA-21的表达量升高与预后不良有显着联系。进一步研讨发现，microRNA-21的表达量与患者的年纪、病理学分型无关（P＞0.05），但随着肿瘤分解程度的下降及淋巴结的搬运，microRNA-21的表达量显着升高，提示microRNA-21可能在卵巢癌肿瘤细胞的滋润及搬运进程中发挥必定的效果，并在必定程度上调控卵巢癌细胞的行为。
综上所述，本试验证明了microRNA-21在卵巢癌安排中呈反常高表达，这一发现可能对卵巢癌的医治和预后具有重要含义，但现在对microRNA-21转录调控的效果机制尚不清晰，需要进行后续研讨。
[参考文献]
[1]Wu Y，Fu X，Zhu X，et al.Prognostic role of systemic inflammatory response in renal cell carcinoma:a systematic review and meta-analysis[J].J Cancer Res Clin Oncol，2011， 137（5）：887-896.
[2]Wang B，Zhang Q.The expression and clinical significance of circulating microRNA-21 in serum of five solid tumors[J].J Cancer Res Clin Oncol，2012，138（10）：1659-1666．
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[4]Lagos-Quintana M，Rauhut R，Lendeckel W，et al.Identification of novel genes coding for small expressed RNAs[J]. Science，2001，294（5543）：853-858.
[5]Iliopoulos D，Jaeger SA，Hirsch HA，et al.STAT3 activation of miR-21 and miR-181b-1 via PTEN and CYLD are part of the epigenetic switch linking inflammation to cancer[J].Mol Cell，2010，39（4）：493-506.
[6]Yang CH，Yue J，Fan M，et al.IFN induces miR-21 through a signal transducer and activator of transcription 3-dependent pathway as a suppressive negative feedback on IFN-induced apoptosis[J].Cancer Res，2010，70（20）：8108-8116.
[7]Braun J，Hoang-Vu C，Dralle H，et al.Downregulation of microRNAs directs the EMT and invasive potential of anaplastic thyroid carcinomas[J].Oncogene，2010，29（29）：4237-4244.
[8]Schetter AJ，Leung SY，Sohn JJ，et al.MicroRNA expression profiles associated with prognosis and therapeutic outcome in colon adenocarcinoma[J].JAMA，2008，299（4）：425-436.
[9]Chang KH，Miller N，Kheirelseid EA，et al.MicroRNA-21 and PDCD4 expression in colorectal cancer[J].Eur J Surg Oncol，2011，37（7）：597-603.
[10]Ma Y，Zhang P，Yang J，et al.Candidate microRNA biomarkers in human colorectal cancer:systematic review profiling studies and experimental validation[J].Int J Cancer，2012，130（9）：2077-2087.
[11]Matsushima L，Isomoto H，Kohno S，et al.MicroRNAs and esophageal squamous cell carcinoma[J].Digestion，2010， 82（3）：138-144.
（收稿日期：2014-04-01本文修改：许俊琴）
