文屏 王建文 蔡珊珊
[摘要] 意图 树立九味肝泰胶囊中人参皂苷Rg1及三七皂苷R1的含量测定办法，补偿该种类质量规范的不完善之处。 办法 选用ACQUITY BEH C18（2.1 mm × 50 mm，1.7 μm）色谱柱；活动相为乙腈-水，梯度洗脱；流速为0.4 ml/min；检测波长为203 nm；柱温为35℃；进样体积为1 μl。 成果 人参皂苷Rg1及三七皂苷R1别离在0.10～1.50 mg/ml，0.04～0.60 mg/ml浓度范围内线性杰出，均匀收回率别离为99.4%、101.8%，RSD别离为0.5%、1.3%。 定论 该法便利、快速、精确，适用于九味肝泰胶囊中人参皂苷Rg1及三七皂苷R1的含量测定，可用于该制剂的质量操控。
[关键词] 超高效液相色谱法；人参皂苷Rg1；三七皂苷R1；含量测定；质量操控
[中图分类号] R927.2 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2014）04（a）-0009-04
[Abstract] Objective To establish an UPLC method for the content determination of ginsenoside Rg1 and notoginsenoside R1 in Jiuweigantai capsule. Methods ACQUITY BEH C18 analytical column（2.1 mm×50 mm，1.7 μm） was used with the mobile phase consisting of acetonitrile-water in gradient elution at a flow rate of 0.4 ml/min.The detection wavelength was 203 nm，column temperature was 35℃，and injection volume was 1 μl. Results Ginsenoside Rg1 and notoginsenoside R1 in Jiuweigantai capsule had good linearity within the range of 0.1-1.5 mg/ml and 0.04-0.6 mg/ml respectively，and their recoveries were 99.4%，101.8%，with RSD of 0.5%，1.3% respectively. Conclusion The method is convenient，quick，correct for determination of ginsenoside Rg1 and notoginsenoside R1 in Jiuweigantai capsule，and can be used for the quality control for Jiuweigantai capsule.
[Key words] Ultra performance liquid chromatography；Ginsenoside Rg1；Notoginsenoside R1；Content determination；Quality control
三七（Panax Notoginseng（Burk.）F.H.Chen）为五加科人参属植物，具有明显的活血化瘀、消肿止痛的成效，其首要活性成分为人参皂苷Rg1及三七皂苷R1，具有明显的抗炎活血效果[1-3]，被广泛应用于各种中成药中。2010年版《中华人民共和国药典》（简称“我国药典”）及其他相关文献均以人参皂苷Rg1和三七皂苷R1作为三七质量操控的目标成分[4-5]。为确保产品质量，有必要对中药成方制剂中人参皂苷Rg1及三七皂苷R1的含量进行质量操控，树立精确、牢靠的查验办法。九味肝泰胶囊收载于《中成药当地规范》上升国家规范内科肝胆分册[6]。由三七、郁金、蒺藜、姜黄、大黄、黄芩、蜈蚣、山药和五味子等9味中药组成，具有化瘀通络、疏肝健脾的效果，能医治缓慢乙型肝炎及HBV携带者，能赶快改善症状，康复体征，改善肝脏微循环，阻断肝病缓慢化开展，促进肝功能的康复[7-8]。现行规范首要触及3个辨别项目，别离是三七药材、大黄（大黄素及大黄酚）、黄芩（黄芩苷）有关成分的辨别以及大黄素含量测定项。现在，九味肝泰胶囊仅有关于大黄素、姜黄素以及黄芩苷等3个成分的HPLC含量测定的文献报导[9-11]，此外，还有选用TLC法对九味肝泰胶囊中的五味子醇甲进行含量测定的报导[12]。现在全国共有2个出产厂家，2个药品批准文号。出产厂家均按现行规范查验。现在该药品的质量规范中关于三七药材仅树立了辨别项目，尚无含量测定质控项目。我国药典2010年版一部对三七药材中有效成分人参皂苷Rg1和三七皂苷R1的含量测定办法选用HPLC，但检测时间比较长。为了进步本品的质量操控规范，树立愈加快速、高效的操控三七药材投料状况的含量测定办法，本研讨选用超高效液相色谱法（ultra performance liquid chromatography，UPLC）对该药品中的人参皂苷Rg1及三七皂苷R1定量剖析办法进行了研讨。
1 仪器与试药
1.1 仪器
Waters ACQUITY UPLC超高液相色谱仪（包含二元梯度泵、自动进样器、柱温箱、PDA检测器及Empower数据处理体系，美国Waters公司出产）。METTLER-TOLEDO XS205电子剖析天平（十万分之一，瑞士Mettler-Toledo公司）。
1.2 试药
人参皂苷Rg1对照品（我国食品药品检定研讨所，批号为：110704-201223，含量以93.4%核算，供含量测定用）；三七皂苷R1对照品（我国药品生物制品检定所，批号：110745-200617，供含量测定用）。九味肝泰胶囊（湖南省新汇制药有限公司，批号：120701、120702）；三七阴性药材（按九味肝泰胶囊处方制备）；乙腈为色谱纯；水为超纯水；其他试剂均为剖析纯。
2 办法与成果
2.1 色谱条件
色谱柱：ACQUITY BEH C18（2.1 mm×50 mm，1.7 μm）；活动相：乙腈-水梯度洗脱（0～2 min：80%水；2～12 min： 80%→81%水）；流速：0.4 ml/min；检测波长：203 nm；柱温：35℃；进样量：1 μl。
2.2 溶液制备
2.2.1 对照品溶液的制备 取人参皂苷Rg1对照品约0.01 g，精细称定，置于10 ml容量瓶中，取三七皂苷R1对照品约0.01 g，精细称定，置于50 ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度。用2 ml移液管转移至20 ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，即得人参皂苷Rg1和三七皂苷R1混合对照品液。
2.2.2 供试品溶液的制备 取样品约0.5 g，精细称定。精细参加甲醇25 ml，称定分量，加热回流1 h，放冷后称定分量，用甲醇补足减失的分量，摇匀后滤过，精细取滤液10 ml，滤液蒸干，用15 ml水溶解，用乙醚萃取3次，每次30 ml，弃去乙醚层。用水饱满正丁醇萃取3次，每次30 ml，兼并正丁醇液，正丁醇液用氨试液洗刷3次，每次30 ml，弃去碱水层，正丁醇液再用正丁醇饱满水洗刷3次，每次30 ml，分取正丁醇液，收回蒸干，残渣用甲醇溶解，转移至10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过（用0.22 μm滤膜），取续滤液，即得。
2.2.3 阴性样品溶液的制备 按制备进程取除三七外的其他药材，制成缺三七阴性样品，按“2.2.2”项下办法制备阴性样品溶液。
2.3 体系适用性试验
别离取对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液各1 μl进样，记载色谱图，成果显现，供试品色谱图中三七皂苷R1和人参皂苷Rg1的色谱峰能与其他成分很好地别离，别离度均>1.5，理论塔板数按三七皂苷R1峰核算>4000，阴性样品溶液在三七皂苷R1、人参皂苷Rg1色谱峰处均无搅扰（图1）。
2.4 线性关系调查
2.5 精细度试验
精细汲取人参皂苷Rg1、三七皂苷R1混合对照品溶液1 μl，按“2.1”项下色谱条件操作，重复进样6次。记载人参皂苷Rg1、三七皂苷R1的峰面积，其RSD值别离为0.4%、0.3%（n=6），标明仪器精细度杰出。
2.6 安稳性试验
精细汲取供试品溶液（批号：120702）1 μl，别离于0、4、8、10、24 h进样测定，核算各成分含量的RSD值。成果提示，人参皂苷Rg1、三七皂苷R1的RSD值别离为1.0%、0.2%，标明供试品溶液在24 h内安稳。
2.7 重复性试验
取同一批样品（批号：120702）6份，别离精细称定，按“2.2”项下办法制备和“2.1”项下色谱条件测定，核算人参皂苷Rg1和三七皂苷R1的含量，成果提示，人参皂苷Rg1、三七皂苷R1的RSD别离为1.7%和2.2%。
2.8 加样收回率试验
称取已知含量的九味肝泰胶囊（批号：120702，含人参皂苷Rg1和三七皂苷R1别离为4.23、0.84 mg/g）6份，每份约0.25 g，精细称定，置具塞锥形瓶中，精细参加一定量的混合对照品溶液，按“2.2.2”项下办法制备和“2.1”项下色谱条件测定，并核算各组分收回率，成果提示，人参皂苷Rg1、三七皂苷R1的均匀收回率别离为99.4%、101.8%，RSD别离为0.5%、1.3%（表1）。
2.9 样品含量测定
别离取相同厂家共2批样品（批号：120701、120702），按“2.2.2”项下办法制备和“2.1”项下色谱条件测定，以外标法进行定量，核算三七皂苷R1和人参皂苷Rg1的含量，成果见表2。
3 评论
3.1 提取溶剂和量的挑选
九味肝泰胶囊归于复方中药制剂，处方含有九味中药，如直接用甲醇等试剂提取，供试品成分较多，搅扰严峻，有必要树立一个适宜的提取办法。本试验提取办法是根据皂苷提取公例的基础上，再加以弥补而打开的。供试品制备办法即用甲醇溶剂加热回流后，滤液用乙醚等极性小的有机溶剂脱脂、然后用水饱满的正丁醇萃取，再用氨试液洗刷除杂[13]，弃除黄酮类苷元等杂质，对搅扰成分如糖类等可选用加正丁醇饱满的水洗刷的办法除掉。本研讨在提取进程中进行了比较，没有进行乙醚脱脂这一进程时，杂峰搅扰严峻，后对提取办法进行改善，用乙醚萃取脱脂后，杂质峰搅扰少，别离效果较好。
试验进程中发现样品用甲醇提取加热回流后，精细量取10 ml的滤液和悉数滤液蒸干的提取效果不同，前者较后者杂质峰较少，别离效果较好。
3.2 提取办法的挑选
本研讨别离对索氏提取、大孔树脂D101和加热回流提取三种提取办法进行调查。参阅相关文献[14-15]，大孔吸附树脂有较强的吸附色素等杂质的才能，可别离得到有效成分，可以到达沙里淘金的意图，但对被测成分有丢失且消耗时间长。索氏提取关于沸点较低溶剂如乙醚的提取率较高，但操作杂乱。终究调查成果显现索氏提取、大孔树脂D101和加热回流提取效果简直相同，故本试验终究选用简洁且提取率高的加热回流办法提取。
[参阅文献]
[1] 华声瑜，曲凤，陈丽平，等.人参皂苷Rg1对血小板集合及环磷腺苷的影响[J].天津中医药大学学报，2012，31（1）：31-33.
[2] 苏华，何飞，邱宏聪，等.三七皂苷R1在抗凝血酶参加下对体外凝血酶活性的影响[J].我国输血杂志，2013，26（2）：191-194.
[3] 赵保胜，桂海水，徐暾海.人参皂苷Rg1抗炎效果试验研讨[J].人参研讨，2010，（4）：2-4.
[4] 刘长青， 何百寅， 赖小平， 等. HPLC测定经络贴巴布剂中3种皂苷的含量[J].广东药学院学报，2010，26（6）： 590-594.
[5] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].一部.北京：我国医药科技出版社，2010：1-12.
[6] 国家中成药规范江编·中成药当地规范上升国家规范部分·内科肝胆分册[Z].2002：132.
[7] 邓立记.九味肝泰胶囊与阿德福韦酯片联合医治乙型肝炎后前期肝硬化的效果剖析[J].临床医学工程，2011，18（7）：1022-1023.
[8] 季雪良，常峰，金凤，等.九味肝泰胶囊联合恩替卡韦医治缓慢乙型肝炎临床研讨[J].中西医结合肝病杂志，2013，23（4）：203-205.
[9] 熊建文，张群，吴灿.高效液相色谱法测定九味肝泰胶囊中大黄素含量[J].中南药学，2003，1（4）：234-236.
[10] 郑冰珊， 陈晓城.高效液相色谱法测定九味肝泰胶囊中黄芩苷含量[J].浙江中医药大学学报，2008，32（5）：677-678.
[11] 叶优苗，张建方，陈宗良.高效液相色谱法测定九味肝泰胶囊中姜黄素含量[J].我国药业，2003，22（11）：41-42.
[12] 蔡步林，王艳，丁野，等.九味肝泰胶囊质量规范的研讨[J].我国药师，2012，15（10）：1442-1444.
[13] 李剑锋，晏亦林.反相高效液相色谱法测定健脾固表颗粒中人参皂苷Rg1、Re的含量[J].医药导报，2006，25（6）：573-574.
[14] 龙彦纲，黄晓其，林荣锋，等.HPLC法一起测定三芎止痛膏中三七皂苷和人参皂苷的含量[J].我国新药与临床药理，2008，19（1）：56-58.
[15] 黄晓其，曾宝，苏子仁.高效液相梯度法测定红花牡丹膏中人参皂苷Rg1、Rb1、Re及三七皂苷R1的含量[J].我国医院药学杂志，2007，27（10）：1393-1396.
（收稿日期：2014-01-09 本文修改：袁 成）
2 办法与成果
2.1 色谱条件
色谱柱：ACQUITY BEH C18（2.1 mm×50 mm，1.7 μm）；活动相：乙腈-水梯度洗脱（0～2 min：80%水；2～12 min： 80%→81%水）；流速：0.4 ml/min；检测波长：203 nm；柱温：35℃；进样量：1 μl。
2.2 溶液制备
2.2.1 对照品溶液的制备 取人参皂苷Rg1对照品约0.01 g，精细称定，置于10 ml容量瓶中，取三七皂苷R1对照品约0.01 g，精细称定，置于50 ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度。用2 ml移液管转移至20 ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，即得人参皂苷Rg1和三七皂苷R1混合对照品液。
2.2.2 供试品溶液的制备 取样品约0.5 g，精细称定。精细参加甲醇25 ml，称定分量，加热回流1 h，放冷后称定分量，用甲醇补足减失的分量，摇匀后滤过，精细取滤液10 ml，滤液蒸干，用15 ml水溶解，用乙醚萃取3次，每次30 ml，弃去乙醚层。用水饱满正丁醇萃取3次，每次30 ml，兼并正丁醇液，正丁醇液用氨试液洗刷3次，每次30 ml，弃去碱水层，正丁醇液再用正丁醇饱满水洗刷3次，每次30 ml，分取正丁醇液，收回蒸干，残渣用甲醇溶解，转移至10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过（用0.22 μm滤膜），取续滤液，即得。
2.2.3 阴性样品溶液的制备 按制备进程取除三七外的其他药材，制成缺三七阴性样品，按“2.2.2”项下办法制备阴性样品溶液。
2.3 体系适用性试验
别离取对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液各1 μl进样，记载色谱图，成果显现，供试品色谱图中三七皂苷R1和人参皂苷Rg1的色谱峰能与其他成分很好地别离，别离度均>1.5，理论塔板数按三七皂苷R1峰核算>4000，阴性样品溶液在三七皂苷R1、人参皂苷Rg1色谱峰处均无搅扰（图1）。
2.4 线性关系调查
2.5 精细度试验
精细汲取人参皂苷Rg1、三七皂苷R1混合对照品溶液1 μl，按“2.1”项下色谱条件操作，重复进样6次。记载人参皂苷Rg1、三七皂苷R1的峰面积，其RSD值别离为0.4%、0.3%（n=6），标明仪器精细度杰出。
2.6 安稳性试验
精细汲取供试品溶液（批号：120702）1 μl，别离于0、4、8、10、24 h进样测定，核算各成分含量的RSD值。成果提示，人参皂苷Rg1、三七皂苷R1的RSD值别离为1.0%、0.2%，标明供试品溶液在24 h内安稳。
2.7 重复性试验
取同一批样品（批号：120702）6份，别离精细称定，按“2.2”项下办法制备和“2.1”项下色谱条件测定，核算人参皂苷Rg1和三七皂苷R1的含量，成果提示，人参皂苷Rg1、三七皂苷R1的RSD别离为1.7%和2.2%。
2.8 加样收回率试验
称取已知含量的九味肝泰胶囊（批号：120702，含人参皂苷Rg1和三七皂苷R1别离为4.23、0.84 mg/g）6份，每份约0.25 g，精细称定，置具塞锥形瓶中，精细参加一定量的混合对照品溶液，按“2.2.2”项下办法制备和“2.1”项下色谱条件测定，并核算各组分收回率，成果提示，人参皂苷Rg1、三七皂苷R1的均匀收回率别离为99.4%、101.8%，RSD别离为0.5%、1.3%（表1）。
2.9 样品含量测定
别离取相同厂家共2批样品（批号：120701、120702），按“2.2.2”项下办法制备和“2.1”项下色谱条件测定，以外标法进行定量，核算三七皂苷R1和人参皂苷Rg1的含量，成果见表2。
3 评论
3.1 提取溶剂和量的挑选
九味肝泰胶囊归于复方中药制剂，处方含有九味中药，如直接用甲醇等试剂提取，供试品成分较多，搅扰严峻，有必要树立一个适宜的提取办法。本试验提取办法是根据皂苷提取公例的基础上，再加以弥补而打开的。供试品制备办法即用甲醇溶剂加热回流后，滤液用乙醚等极性小的有机溶剂脱脂、然后用水饱满的正丁醇萃取，再用氨试液洗刷除杂[13]，弃除黄酮类苷元等杂质，对搅扰成分如糖类等可选用加正丁醇饱满的水洗刷的办法除掉。本研讨在提取进程中进行了比较，没有进行乙醚脱脂这一进程时，杂峰搅扰严峻，后对提取办法进行改善，用乙醚萃取脱脂后，杂质峰搅扰少，别离效果较好。
试验进程中发现样品用甲醇提取加热回流后，精细量取10 ml的滤液和悉数滤液蒸干的提取效果不同，前者较后者杂质峰较少，别离效果较好。
3.2 提取办法的挑选
本研讨别离对索氏提取、大孔树脂D101和加热回流提取三种提取办法进行调查。参阅相关文献[14-15]，大孔吸附树脂有较强的吸附色素等杂质的才能，可别离得到有效成分，可以到达沙里淘金的意图，但对被测成分有丢失且消耗时间长。索氏提取关于沸点较低溶剂如乙醚的提取率较高，但操作杂乱。终究调查成果显现索氏提取、大孔树脂D101和加热回流提取效果简直相同，故本试验终究选用简洁且提取率高的加热回流办法提取。
[参阅文献]
[1] 华声瑜，曲凤，陈丽平，等.人参皂苷Rg1对血小板集合及环磷腺苷的影响[J].天津中医药大学学报，2012，31（1）：31-33.
[2] 苏华，何飞，邱宏聪，等.三七皂苷R1在抗凝血酶参加下对体外凝血酶活性的影响[J].我国输血杂志，2013，26（2）：191-194.
[3] 赵保胜，桂海水，徐暾海.人参皂苷Rg1抗炎效果试验研讨[J].人参研讨，2010，（4）：2-4.
[4] 刘长青， 何百寅， 赖小平， 等. HPLC测定经络贴巴布剂中3种皂苷的含量[J].广东药学院学报，2010，26（6）： 590-594.
[5] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].一部.北京：我国医药科技出版社，2010：1-12.
[6] 国家中成药规范江编·中成药当地规范上升国家规范部分·内科肝胆分册[Z].2002：132.
[7] 邓立记.九味肝泰胶囊与阿德福韦酯片联合医治乙型肝炎后前期肝硬化的效果剖析[J].临床医学工程，2011，18（7）：1022-1023.
[8] 季雪良，常峰，金凤，等.九味肝泰胶囊联合恩替卡韦医治缓慢乙型肝炎临床研讨[J].中西医结合肝病杂志，2013，23（4）：203-205.
[9] 熊建文，张群，吴灿.高效液相色谱法测定九味肝泰胶囊中大黄素含量[J].中南药学，2003，1（4）：234-236.
[10] 郑冰珊， 陈晓城.高效液相色谱法测定九味肝泰胶囊中黄芩苷含量[J].浙江中医药大学学报，2008，32（5）：677-678.
[11] 叶优苗，张建方，陈宗良.高效液相色谱法测定九味肝泰胶囊中姜黄素含量[J].我国药业，2003，22（11）：41-42.
[12] 蔡步林，王艳，丁野，等.九味肝泰胶囊质量规范的研讨[J].我国药师，2012，15（10）：1442-1444.
[13] 李剑锋，晏亦林.反相高效液相色谱法测定健脾固表颗粒中人参皂苷Rg1、Re的含量[J].医药导报，2006，25（6）：573-574.
[14] 龙彦纲，黄晓其，林荣锋，等.HPLC法一起测定三芎止痛膏中三七皂苷和人参皂苷的含量[J].我国新药与临床药理，2008，19（1）：56-58.
[15] 黄晓其，曾宝，苏子仁.高效液相梯度法测定红花牡丹膏中人参皂苷Rg1、Rb1、Re及三七皂苷R1的含量[J].我国医院药学杂志，2007，27（10）：1393-1396.
（收稿日期：2014-01-09 本文修改：袁 成）
2 办法与成果
2.1 色谱条件
色谱柱：ACQUITY BEH C18（2.1 mm×50 mm，1.7 μm）；活动相：乙腈-水梯度洗脱（0～2 min：80%水；2～12 min： 80%→81%水）；流速：0.4 ml/min；检测波长：203 nm；柱温：35℃；进样量：1 μl。
2.2 溶液制备
2.2.1 对照品溶液的制备 取人参皂苷Rg1对照品约0.01 g，精细称定，置于10 ml容量瓶中，取三七皂苷R1对照品约0.01 g，精细称定，置于50 ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度。用2 ml移液管转移至20 ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，即得人参皂苷Rg1和三七皂苷R1混合对照品液。
2.2.2 供试品溶液的制备 取样品约0.5 g，精细称定。精细参加甲醇25 ml，称定分量，加热回流1 h，放冷后称定分量，用甲醇补足减失的分量，摇匀后滤过，精细取滤液10 ml，滤液蒸干，用15 ml水溶解，用乙醚萃取3次，每次30 ml，弃去乙醚层。用水饱满正丁醇萃取3次，每次30 ml，兼并正丁醇液，正丁醇液用氨试液洗刷3次，每次30 ml，弃去碱水层，正丁醇液再用正丁醇饱满水洗刷3次，每次30 ml，分取正丁醇液，收回蒸干，残渣用甲醇溶解，转移至10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过（用0.22 μm滤膜），取续滤液，即得。
2.2.3 阴性样品溶液的制备 按制备进程取除三七外的其他药材，制成缺三七阴性样品，按“2.2.2”项下办法制备阴性样品溶液。
2.3 体系适用性试验
别离取对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液各1 μl进样，记载色谱图，成果显现，供试品色谱图中三七皂苷R1和人参皂苷Rg1的色谱峰能与其他成分很好地别离，别离度均>1.5，理论塔板数按三七皂苷R1峰核算>4000，阴性样品溶液在三七皂苷R1、人参皂苷Rg1色谱峰处均无搅扰（图1）。
2.4 线性关系调查
2.5 精细度试验
精细汲取人参皂苷Rg1、三七皂苷R1混合对照品溶液1 μl，按“2.1”项下色谱条件操作，重复进样6次。记载人参皂苷Rg1、三七皂苷R1的峰面积，其RSD值别离为0.4%、0.3%（n=6），标明仪器精细度杰出。
2.6 安稳性试验
精细汲取供试品溶液（批号：120702）1 μl，别离于0、4、8、10、24 h进样测定，核算各成分含量的RSD值。成果提示，人参皂苷Rg1、三七皂苷R1的RSD值别离为1.0%、0.2%，标明供试品溶液在24 h内安稳。
2.7 重复性试验
取同一批样品（批号：120702）6份，别离精细称定，按“2.2”项下办法制备和“2.1”项下色谱条件测定，核算人参皂苷Rg1和三七皂苷R1的含量，成果提示，人参皂苷Rg1、三七皂苷R1的RSD别离为1.7%和2.2%。
2.8 加样收回率试验
称取已知含量的九味肝泰胶囊（批号：120702，含人参皂苷Rg1和三七皂苷R1别离为4.23、0.84 mg/g）6份，每份约0.25 g，精细称定，置具塞锥形瓶中，精细参加一定量的混合对照品溶液，按“2.2.2”项下办法制备和“2.1”项下色谱条件测定，并核算各组分收回率，成果提示，人参皂苷Rg1、三七皂苷R1的均匀收回率别离为99.4%、101.8%，RSD别离为0.5%、1.3%（表1）。
2.9 样品含量测定
别离取相同厂家共2批样品（批号：120701、120702），按“2.2.2”项下办法制备和“2.1”项下色谱条件测定，以外标法进行定量，核算三七皂苷R1和人参皂苷Rg1的含量，成果见表2。
3 评论
3.1 提取溶剂和量的挑选
九味肝泰胶囊归于复方中药制剂，处方含有九味中药，如直接用甲醇等试剂提取，供试品成分较多，搅扰严峻，有必要树立一个适宜的提取办法。本试验提取办法是根据皂苷提取公例的基础上，再加以弥补而打开的。供试品制备办法即用甲醇溶剂加热回流后，滤液用乙醚等极性小的有机溶剂脱脂、然后用水饱满的正丁醇萃取，再用氨试液洗刷除杂[13]，弃除黄酮类苷元等杂质，对搅扰成分如糖类等可选用加正丁醇饱满的水洗刷的办法除掉。本研讨在提取进程中进行了比较，没有进行乙醚脱脂这一进程时，杂峰搅扰严峻，后对提取办法进行改善，用乙醚萃取脱脂后，杂质峰搅扰少，别离效果较好。
试验进程中发现样品用甲醇提取加热回流后，精细量取10 ml的滤液和悉数滤液蒸干的提取效果不同，前者较后者杂质峰较少，别离效果较好。
3.2 提取办法的挑选
本研讨别离对索氏提取、大孔树脂D101和加热回流提取三种提取办法进行调查。参阅相关文献[14-15]，大孔吸附树脂有较强的吸附色素等杂质的才能，可别离得到有效成分，可以到达沙里淘金的意图，但对被测成分有丢失且消耗时间长。索氏提取关于沸点较低溶剂如乙醚的提取率较高，但操作杂乱。终究调查成果显现索氏提取、大孔树脂D101和加热回流提取效果简直相同，故本试验终究选用简洁且提取率高的加热回流办法提取。
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（收稿日期：2014-01-09 本文修改：袁 成）
