王爱红
[摘要] 意图 研讨打针用炎琥宁对细菌内毒素查看试验的搅扰状况，树立其细菌内毒素定量及查看办法。 办法 按《我国药典》2010年版二部附录Ⅺ E进行试验，选用细菌内毒素凝胶法，用2个厂家的鲎试剂对3批打针用炎琥宁进行搅扰试验和成果的判别。 成果 打针用炎琥宁最大不搅扰浓度为0.33 mg/ml，即需求稀释240倍对测定不发生搅扰。 定论 打针用炎琥宁细菌内毒素限值断定为0.75 EU/mg，可选用凝胶法运用鲎试剂进行细菌内毒素查看。
[关键词] 打针用炎琥宁；细菌内毒素；凝胶法；鲎试剂；搅扰试验
[中图分类号] R286.0 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2015）08（c）-0095-03
[Abstract] Objective To study the interference to bacterial endotoxin test from Potassium Sodium Pehydroandrographolide Succinate for Injection，and estsblish a method of the limits and detection of bacterial endotoxin. Methods The experiment was performed according to Appendix Ⅺ E of Chinese Pharmacopeia （2010 edition，2 volume），interference experiment and result analysis were made in three batch samples of Potassium Sodium Pehydroandrographolide Succinate for Injection，in which bacterial endotoxin method of gelation assay was used by tachypleus amebocyte lysate （TAL） from two different manufacturers. Results The maximum noninterference concentration of Potassium Sodium Pehydroandrographolide Succinate for Injection was 0.33 mg/ml，which meaned the inhibition effect could be eliminated by diluting to 240 times. Conclusion The bacterial endotoxin test can be used to detect the endotoxins in Potassium Sodium Pehydroandrographolide Succinate for Injection and the bacterial endotoxin limit is 0.75 EU/mg.
[Key words] Potassium Sodium Pehydroandrographolide Succinate for Injection；Bacterial endotoxin；Gelation assay；Tachypleus amebocyte lysate；Interference test
打针用炎琥宁是由穿心莲内酯半酯单钾盐和适量的辅料组成的冻干制剂，具有促进发热的衰退、添加机体对病原体感染的才能，有显着的冷静效果，临床常用于医治病毒性肺炎和病毒性上呼吸道感染。
打针用炎琥宁的运用阐明书依据国家食品药品监督管理局审阅同意履行，静脉滴注，0.16～0.4 g/d，用0.5%葡萄糖氯化钠打针液稀释后滴注，其质量规范WS-B-10001-（HD-0016）-2002项下的热原查看法为家兔法。此法操作繁琐，不利于快速检测，因而本文依据《我国药典》2010年版二部Ⅺ E“细菌内毒素查看法”，运用鲎试剂对其冻干打针剂的细菌内毒素查看进行可行性的办法学研讨，并给出细菌内毒素限值，为试验室对其质量进行快速并精确的查看供给依据。
1仪器与试药
1.1 仪器
数显式电热恒温水浴箱（上海跃进医疗器械公司，类型：HH·W21·420S）；漩涡混合器（上海举世物化仪器厂，类型：WH-861）。试验所用的相关器皿均经250℃枯燥1 h，以到达无外源性内毒素。
1.2 试药
打针用炎琥宁（安徽宏业药业有限公司，批号：150302、150304、150306、150308、150310、150312，规范：80 mg）。鲎试剂（湛江博康海洋生物有限公司，批号：1408300，规范：0.25 EU/ml，0.1 ml/支；福建新北生化有限公司，批号：14080912，规范：0.25 EU/ml，0.1 ml/支）。细菌内毒素作业规范品（我国食品药品检定研讨院，批号：150601-201478，规范：80 EU/支）。细菌内毒素查看用水（湛江博康海洋生物有限公司，批号：1405130，规范：5 ml/支）。
2 办法与成果
2.1 鲎试剂灵敏度的复核
为调查鲎试剂灵敏度的标明值（λ）是否精确、人员操作办法是否正确及试验条件是否符合规则，按《我国药典》2010年版二部附录Ⅺ E细菌内毒素查看法试验，对本试验所用2个厂家的鲎试剂进行灵敏度复核，要求所用的灵敏度在0.5λ～2.0λ之间。成果标明，上述2个厂家的鲎试剂均在灵敏度规模内，复核合格（表1），能够用于搅扰试验和供试品的细菌内毒素查看。
2.2 细菌内毒素限值L的断定
依据细菌内毒素限值的核算公式：L=K/M，其间L为供试品细菌内毒素的限值，本品以EU/mg标明。K为按规则的给药途径，人用每公斤体重每小时最大可接受的内毒素的量，以EU/（kg·h）标明，其间打针剂，K=5 EU/（kg·h）；M为每公斤每小时最大的药物剂量，以mg/（kg·h）标明，人均体重按60 kg核算。本品成人一般1～2次/d，静脉滴注160～400 mg，可依据年纪、症状适量增减，用药剂量极限为400 mg/d。按临床剂量1次400 mg炎琥宁核算，L=K/M=5 EU/（kg·h）/[400 mg/60（kg·h）]=0.75 EU/mg。
2.3供试品搅扰试验预试验
运用上述2个厂家的鲎试剂，开始断定打针用炎琥宁的最大不搅扰浓度。依据供试品L为0.75 EU/mg，取本品1瓶，加细菌内毒素查看用水5 ml使溶解，别离再用细菌内毒素查看用水稀释成20、120、240、480倍系列浓度的溶液，将20、120、240、480倍的系列溶液标记为供试品阴性对照（NPC）；一起在20、120、240、480倍的系列溶液中参加等体积细菌内毒素作业规范品，制成2.0λ的内毒素规范溶液标记为供试品阳性对照（PPC）；每个浓度平行做2支。另取2支鲎试剂参加2.0λ的内毒素规范溶液作为阳性对照（PC）；2支参加查看用水作为阴性对照（NC）。当呈现NPC为阴性，PPC为阳性时，则供试品在该稀释倍数下不搅扰试验。成果标明，打针用炎琥宁对细菌内毒素查看有搅扰，但能够经过稀释消除。开始断定打针用炎琥宁的最大不搅扰浓度为0.33 mg/ml，即需稀释240倍以上，可在此浓度下进行正式的搅扰试验（表2）。
2.4 供试品搅扰试验
依据预试验的成果，在进行正式搅扰试验时挑选供试品最大不搅扰浓度为0.33 mg/ml。取3批打针用炎琥宁，运用上述2个厂家灵敏度为0.25 EU/ml的鲎试剂，别离用稀释成0.33 mg/ml的供试品溶液将细菌内毒素作业规范品稀释成0.5、0.25、0.125、0.0625 EU/ml的系列细菌内毒素溶液，检测供试品在此浓度下是否对细菌内毒素查看存在搅扰。每一浓度平行做4支，一起用供试品溶液作为2支NC，（37±1）℃下保温60 min后调查成果。经用2个厂家出产的鲎试剂进行正式搅扰试验，成果Es在0.5λ～2.0λ规模内，Et在0.5 Es～2.0 Es的规模内，阐明供试品在进行240倍稀释后已扫除搅扰效果，在此浓度下能够对打针用炎琥宁进行细菌内毒素查看（表3、表4）。
2.5供试品的细菌内毒素查看
取打针用炎琥宁6批，按《我国药典》2010年版二部附录ⅪE依法查看，按炎琥宁核算，每毫克炎琥宁中含内毒素的量应小于0.75 EU。在查看中，每批供试品做2支供试管NPC和2支供试管PPC，一起做2支PC和2支NC。成果标明，供试管和阴性管均为阴性，阳性管和供试品阳性管均为阳性，阐明3批样品的细菌内毒素含量均小于0.75 EU/mg，符合规则（表5）。
3 评论
细菌内毒素是革兰氏阴性杆菌成长或逝世时裂解出来的菌膜脂多糖成分。作为非肠道药物的质量操控，家兔法是传统的查看法。因兔试验法影响要素多，不能规范化。选用细菌内毒素法操控打针剂的产品质量是药品查验的发展趋势。本试验对选用细菌内毒素查看法操控打针用炎琥宁质量进行了可行性研讨。在试验前，研讨炎琥宁出产工艺的运用，笔者首要调查了质料溶媒打针用水和13个批次打针用炎琥宁中间体的热原（细菌内毒素）污染状况，成果标明打针用水和中间体的细菌内毒素均不超支，为打针用炎琥宁选用鲎试剂法操控其内毒素供给了研讨根底。
打针用炎琥宁对不同厂家的鲎试剂可能存在不同的搅扰程度，因而在搅扰预试验中运用了2个厂家的鲎试剂进行凝胶法内毒素查看，成果标明2个厂家的鲎试剂查验成果共同，因而断定打针用炎琥宁的最大不搅扰浓度为0.33 mg/ml，即稀释240倍。
正式的搅扰试验用了2个厂家的鲎试剂（灵敏度为0.25 EU/ml），对3批经稀释240倍的打针用炎琥宁别离进行细菌内毒素的搅扰试验，成果显现Es均在0.5λ～2.0λ规模，供试品均在0.5Es～2.0Es的规模，承认在此浓度下本品细菌内毒素与鲎试剂的反响试验无搅扰效果。
在细菌内毒素限值断定为0.75 EU/mg的状况下，用2个厂家灵敏度为0.25 EU/ml的鲎试剂按凝胶法别离对6个批次供试品进行内毒素查看，成果均符合规则，标明打针用炎琥宁可选用鲎试剂进行细菌内毒素查看。
别的，打针用炎琥宁的细菌内毒素查看办法如下：取本品，依法查看（《我国药典》2010年版二部附录Ⅺ E），按炎琥宁核算，每毫克炎琥宁中含内毒素的量应小于0.75 EU。依据此法树立的细菌内毒素查看法是可行的，且便利快速，成果精确牢靠。
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（收稿日期：2015-03-31 本文修改：卫 轲）
