马超 冯文华 韩维田
[摘要]意图 比较FP、FP-V1和FP-V2在彻底流产患者与不彻底流产患者早孕蜕膜中mRNA的表达差异。办法 选取2013年6月～2015年3月辽宁省计划生育科研院门诊自动要求药物流产停止正常妊娠的50例患者作为研讨目标，根据流产是否彻底分为彻底组（30例）和不彻底组（20例）。选用实时定量PCR办法检测两组早孕蜕膜中FP、FP-V1和FP-V2的表达差异。成果 不彻底组早孕蜕膜中的FP和FP-V2的mRNA表达显着高于彻底组，差异有统计学含义（P<0.05）。两组的FP-V1表达比较，差异无统计学含义（P>0.05）。定论 人早孕蜕膜FP-V2 mRNA高表达可能与不彻底流产相关。
[要害词]FP-V2亚型；药物流产；蜕膜；不彻底流产；早孕
[中图分类号] R719.3+1 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2017）01（a）-0009-04
米非司酮配伍米索前列醇停止早孕最早使用于1988年而且已经在31个国家广泛展开[1]。在我国，米非司酮配伍米索前列醇的彻底流产率能够到达93%左右[2]，可是仍有部分妇女遭受流产不全带来的困扰，存在着流血时间长、生殖体系感染和贫血等一系列问题[3]。米非司酮是一种组成类醇，具有抗孕酮、糖皮质激素和轻度抗雄激素特性，其靶结合位点是孕激素受体PR[4]。较早的研讨认为，米非司酮抗早孕的机制是绒毛膜和蜕膜安排细胞失掉孕激素的支撑，使得蜕膜安排和绒毛滋补细胞发作变性、坏死，终究导致胚胎逝世而停止妊娠[5]。最近的研讨发現，米非司酮能够使蜕膜安排中孕激素受体（PR）表达下降[6]，人绒毛促性腺激素（β-HCG）[7]、雌二醇（E2）和睾酮（T）均持续添加；一起米非司酮还能够下调蜕膜中的转化生长因子-β（TGF-β）与其受体的转录，进步血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的水平[8]。卢士燕等[9]报导，使用米非司酮后，CD56+特别是CD16+表达显着增高，提示NK细胞表达增高，杀伤活性增强，在药物流产中发挥必定效果。
总结以上的研讨来看，药物流产是一个多方面、多要素参加的进程。药物流产尽管已经在临床展开了三十余年，但其停止早孕的机制仍不清楚。前列腺素受体在哺乳动物生殖进程中发挥着要害而杂乱的调理效果。前列腺素参加卵泡排出的进程[10]，在胚胎植入进程中发挥重要效果[11]，在出产进程中多种前列腺素受体别离表达于子宫和子宫肌层来发挥各自不同的生物学效果[12]。尽管前列腺素受体在生殖范畴发挥杂乱的效果，可是前列素受体在药物流产进程中的效果未见有报导。本研讨选取我院的正常早孕、且自动要求挑选药物流产停止妊娠的健康妇女作为研讨目标，选用实时定量PCR技能检测早孕蜕膜中FP、FP-V1和FP-V2表达的差异，评论其与药物流产结局的联系，以便进一步为研讨药物流产的机制供给思路，为流产不全患者削减苦楚和困扰。
1材料与办法
1.1一般材料
选取2013年6月～2015年3月辽宁省计划生育科学研讨院门诊自动要求药物流产停止正常妊娠的50例患者作为研讨目标，一切患者在安排搜集前均签署知情同意书。蜕膜取自正常妊娠<49 d、经B超确诊为宫内妊娠、尿液妊娠实验确诊为阳性的健康药物流产患者。根据流产是否彻底分为彻底组（30例）和不彻底组（20例），两组的一般材料比较，差异无统计学含义（P>0.05），具有可比性。
1.2分组
1.2.1彻底组 在米非司酮和米索前列醇用药6 h内，孕囊能够彻底排出。
1.2.2不彻底组 在6 h内不能排出孕囊或孕囊排出不完整。
1.3仪器及试剂
PCR仪（美国使用体系生物公司，Veriti 9902）；实时定量PCR仪（美国使用体系生物公司，ABI7000）；安排RNA提取试剂盒（北京艾德莱生物科技有限公司，RN05）；逆转录酶（TAKARA公司，DRR047S）；SYBR Premix Ex TagTMⅡ（TAKARA公司，DRR037A）。
1.4安排RNA提取
依照艾德莱安排RNA试剂盒的操作流程进行提取，提取的RNA置于-80℃冰箱备用。
1.5反转录及实时定量
反转录以安排RNA为模板，反响体系为：5×Buffer 2 μl，Oligo dT Primer 0.5 μl，Random 6 mers 0.5 μl，RT Enzyme 0.5 μl，RNA 500 ng，RNase Free dH2O补足至10 μl。37℃ 30 min，85℃ 15 s。
以反转录的cDNA为模板，实时定量PCR的反响体系为：SYBR Prime Ex TaqTM 10 μl，PCR正反向引物各0.8 μl，ROXⅡ 0.4 μl，ddH2O 7 μl。反响参数为95℃ 30 s，95℃ 15 s，60℃ 31 s，共40个循环。GAPDH为内参，选用2-△△CT相对定量的办法进行核算。
1.6统计学剖析
选用SPSS 17.0 统计学软件对数据进行剖析，对定量PCR成果选用单要素ANOVA剖析，以P<0.05为差异有统计学含义。
2成果
2.1 FP-V2在人早孕蜕膜中的表达
随机选取4例患者蜕膜安排，选用RT-PCR检测办法检测到FP-V2在人早孕蜕膜安排均有表达（图1）。
2.2 FP、FP-V1和FP-V2在彻底组和不彻底组药物流产蜕膜安排中的表达
不彻底流产组蜕膜中FPmRNA（8.35±0.28）的表达显着升高，是彻底组（3.17±0.22）的2.63倍（P<0.05）（图2A）。FP-V1 mRNA在彻底组和不彻底组蜕膜中的表达比较，差异无统计学含义（P>0.05）（图2B）。不彻底流产组蜕膜中FP-V2 mRNA（11.32±0.88）的表达显着升高，是彻底组（4.51±0.46）的2.51倍（P<0.05）（图2C）。
3评论
米非司酮配伍米索前列醇是一个老练、有用的停止早孕的办法，可是仍有部分妇女接受药物流产不彻底（5%）、流血过多（3%）和持续妊娠（1%）的困扰[13]。在米非司酮配伍米索前列醇流产进程中，阴道出血的危险也在升高[14]。尽管药物流产在临床中被广泛使用，可是其是一个多要素参加的进程，首要机制仍不清晰。此外，也有多种临床规范如子宫内膜厚度、药物流产次数和β-hCG[15]等来判别和猜测流产的结局，可是，仍未找到一个精确、牢靠的目标来辅导临床，因而，寻觅一个清晰的要从来猜测药物流产的结局至关重要。本研讨拟从药物流产的敏感性动身，来研讨与药物流产敏感性相关的因子，探求药物流产的机制，更好地为临床处理实际问题。
蜕膜是母-胎界面来自母体的重要组成部分，具有广泛的生物学功用，除了具有养分支撑效果外，还具有组成排泄、免疫调理等生物学功用，在妊娠进程中具有重要含义。一起蜕膜是PGF2α组成和代谢的首要场所，而且蜕膜也是其发挥效果的场所[16]。在前期妊娠进程中，米非司酮能够使PGF2α的组成增多，代谢削减。前列腺素FP受体子宫内膜异位症的血管生成添加[17]，出产进程中的子宫肌层添加[18]，前列腺素PGF2α在出产进程中是一个重要的出产发动要素，可是在药物流产方面未见报导。妊娠出产进程和药物流产都是妊娠停止进程，前列腺素FP受体在出产进程有重要效果，那么从前列腺素FP受体下手，找到一个能够预知药物流产结局的要素，能够为更好地研讨和了解药物流产机制供给思路。
前列腺素受體FP包括FP-V1和FP-V2两个亚型，FP-V1亚型是传统亚型，现在对其研讨比较透彻；可是FP-V2亚型是一个新发现亚型，其功用简直未见报导。本研讨选取4例早孕蜕膜，选用RT-PCR办法检测到早孕蜕膜中均有FP-V2的表达，这与Hay等[19]的研讨成果共同，提示FP-V2在人早孕蜕膜安排中有表达。其在蜕膜中很多特异性表达提示FP-V2可能参加妊娠的一些生理进程。此外，本研讨还检测到FP和FP-V2在不彻底流产组蜕膜中的表达要显着高于彻底流产组，而FP-V1在两组中无显着不同，提示FP-V2在蜕膜中表达的升高与药物流产的不彻底有必定相关性，这可能是影响药物流产结局的一个要素。一起，整体的前列腺素FP受体在不彻底组中的表达也升高，而FP-V1亚型的表达则无显着变化，提示FP受体在不彻底流产蜕膜中的这个升高可能也是由FP-V2的升高引起。
综上所述，米非司酮配伍米索前列醇停止早孕是一个多要素参加的进程，在药物流产的不彻底组蜕膜中FP-V2表达升高，在彻底组蜕膜中表达下降，提示FP-V2关于药物流产进程是一个负向调理要素，其升高不利于药物流产的彻底性。关于FP-V2与药物流产结局的相关能够为更好地研讨药物流产机制供给思路和方向，一起关于FP-V2功用的进一步探求可能会药物流产不彻底供给一个潜在的分子靶点和治疗根据。
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（收稿日期：2016-10-15 本文編辑：祁海文）
