周慧+郑一敏+胥秀英
[摘要] 意图 优选双氢青蒿素（DHA）-羟丙基-β-环糊精（HP-β-CD）包合物的制备工艺。 办法 采纳正交试验法，以HP-β-CD∶DHA、乙醇浓度、HP-β-CD浓度为调查要素，包合物的载药量和得率为调查目标，优选包合物的制备工艺。 成果 DHA-HP-β-CD包合物的最佳制备条件为：主客分子比为4∶1，90%乙醇作溶媒，HP-β-CD浓度为15%。包合物载药量可达6.26%，得率达94.03%。 定论 优选出的工艺合理、可行，可作为DHA包合物的制备工艺。
[关键词] 双氢青蒿素；羟丙基-β-环糊精；包合物；正交试验
[中图分类号] R943 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2016）03（b）-0009-03
[Abstract] Objective To optimize the preparation technology of Dihydroartemisine（DHA）-hydroxypropyl-β-cyclodextrin（HP-β-CD） inclusion compound. Methods Orthogonal test was used.Molecular mole ratio of HP-β-CD and DHA，ethanol concentration and HP-β-CD concentration were used as investigate factors and drug loading capacity and yield of inclusion compound were used as investigate index to optimize the preparation technology of inclusion compound. Results The best preparation conditions of DHA-HP-β-CD inclusion compound were as follows，host-guest molecular ratio was 4∶1，90% ethanol as solvent，the concentration of HP-β-CD was 15%.The drug loading capacity of inclusion compound reached 6.26% and yield reached 94.03%. Conclusion The optimized preparation technology is reasonable and feasible，can be the preparation technology of double hydrogen artemisinin inclusion compound.
[Key words] Dihydroartemisine；Hydroxypropyl-β-cyclodextrin；Inclusion compound；Orthogonal test
青蒿素及其衍生物是一类高效、速效、低毒的抗疟药物。近几年的研讨发现，青蒿素及其衍生物除具有抗疟效果外，还具有多种抗肿瘤效果[1-3]。双氢青蒿素（DHA）是青蒿素的一个重要衍生物，其对疟疾的医治优于青蒿素，抗疟效果是青蒿素的4～8倍[4-5]。但DHA的水溶性较差，影响其生物利费用。本文使用羟丙基-β-环糊精（HP-β-CD）对DHA进行包合，制成包合物。包合物载药量和得率高于相关文献报导，能增强DHA的生物利费用。
1 仪器与试药
1.1 仪器
85-3恒温磁力拌和器（上海精细仪器仪表有限公司）；RX841Y型电热鼓风烘箱（荣欣烘箱制造厂）；UV1800紫外分光光度计（上海精细仪器仪表有限公司）；Waters高效液相色谱仪（Waters 1252二元泵，Waters 2847 UV检测器）；Breeze HPLC工作站；JA2003AD电子天平（上海精天仪器有限公司）；纯水主动三重纯水蒸馏器（北京瑞邦兴业科技有限公司）；KQ-50型超声波清洗器（上海精细仪器仪表公司）。
1.2 试药
DHA规范品（我国药品生物制品检定所，100184-200805）；DHA（重庆通和制药有限公司，批号20120201，纯度为99.2%）；HP-β-CD（上海源叶生物，批号120805）；所用试剂均为剖析纯；试验用水为三蒸水（试验室克己）。
2 办法与成果
2.1 DHA-HP-β-CD包合物制备
称取适量的HP-β-CD、DHA于烧杯中，选用溶液-拌和法，参加适量90%乙醇，磁力拌和30 min，于40℃减压收回乙醇，浓缩产品用30 ml蒸馏水溶解，抽滤，别离搜集滤液和沉积，烘箱枯燥（60℃），即得[6-9]。
2.2 DHA-HP-β-CD包合物制备工艺优化
依据文献办法[10-15]及预试验成果，挑选对包合效果影响较大的参数，即HP-β-CD和DHA的分子摩尔比、乙醇浓度、HP-β-CD浓度，每个要素3个水平，以包合物的载药量和收率作为调查目标，选用L9（34）正交表[16]进行试验，要素水平见表1。
2.3 包合物载药量及收率的测定
2.3.1 色谱条件[4，17-19] Hypersil C18柱（250 mm×4.0 mm，10 μm）；活动相：乙腈-水（60∶40）；流速为1.0 ml/min；柱温：20℃；检测波长：210 nm；进样量：10 μl。
2.3.2 规范曲线的制备[4] 精细称取DHA规范品适量，配制成1.0 mg/ml甲醇溶液作为对照品；在上述条件下别离进样2、6、8、10、20、40 μl，记载色谱峰面积。以峰面积对浓度进行回归，得回归方程：Y=5.4315×104X+4.72×102（r=0.999），线性规模2.0～40 μg。精细度试验：取同一份供试品溶液，按2.3.1所述办法，平行检测6次，成果RSD为0.39%，阐明此法精细度杰出。安稳性试验：供试品溶液避光寄存，别离于0、2、4、8、12、24 h测定，调查供试品的安稳性，成果RSD为1.56%，标明在24 h内根本安稳。收回率试验：精细称取适量DHA规范品3份，参加HP-β-CD适量，超声溶解，测定DHA质量浓度，成果收回率别离为98.8%（RSD=0.86%）、97.8%（RSD=1.06%）、98.3%（RSD=0.96%）。
2.3.3 包合物包合率及得率的测定[4，20-21] 精细称取包合物150 mg，将其置于20 ml容量瓶中，加甲醇溶解定容，超声30 min，0.45 μm滤膜过滤，取滤液进行含量测定，依据峰面积核算包合物载药量及收率。
以DHA收率及包合物载药量为调查目标，直观剖析和方差剖析成果显现，DHA-HP-β-CD包合物的最佳工艺条件：主客分子比为4∶1，用90%乙醇作溶媒，HP-β-CD浓度为15%。依据极差R断定各要素对包合成果影响次序：B>A>C。其间，A、B两个要素对成果有明显性影响。方差剖析来判别，FB>FA>FC，提示乙醇浓度挑选在包合物制备中具有明显统计学含义。
2.4 验证试验
依据正交优化成果，本研讨挑选A3B2C1处方进行试验，重复6次，以验证该处方的优越性，成果显现，6次验证试验包合物的载药量均高于正交表中9次试验成果，且安稳性和重现性好（表5）。
3 评论
DHA是我国自主研发的抗疟疾药物，近年来研讨发现，其除具有抗疟效果外，还具有抗炎、抗肿瘤、保肝和抗神经毒性等效果[1]，具有很好的临床使用价值。可是其难溶于水，水溶性差，口服吸收差、生物利费用低，然后影响其效果。HP-β-CD在改进难溶药物的水溶性、进步药物的生物利费用、增强药物安稳性、隐瞒不良气味等方面具有广泛的使用。HP-β-CD具有表面活性低、不良反应少、包合简略、安全性高和包合可逆等特色，因而本研讨选用HP-β-CD对DHA进行包合。
常用的包合物制备办法有超声波法、饱满水溶液法、溶液拌和法等。笔者前期通过预试验对包合物制备办法进行了优选。HP-β-CD在水中的溶解度很大，故扫除选用饱满水溶液法进行制备。超声波法和饱满水溶液法制备包合物的效果相差不大，可是因为超声波法噪声较大，影响身体健康，故选用溶液拌和法进行包合物的制备。该办法包合效果好，操作简略，设备出资少，易于工业化出产。包合物枯燥办法亦是影响饱满效果的重要要素，常用的枯燥办法有真空减压枯燥、冷冻枯燥、喷雾枯燥等办法，本文选用减压枯燥法，先抽真空进行浓缩，再于烘箱60℃进行枯燥，该办法成本低，操作简略。包合物制备最佳工艺优化：DHA在酒精中有必定的溶解度，故选用酒精作为溶媒进行包合。DHA溶于酒精后出现不同的黏度，对包合效果有不同程度的影响，太黏不利于包合物的生成，而浓度太低又会下降包合物的得率，本文选用90%的酒精作为溶媒。HP-β-CD易溶于水，可是添加浓度黏度增大，不利于包合，故挑选HP-β-CD浓度为15%。DHA和HP-β-CD的分子摩尔比是影响包合效果的重要要素，通过正交优化本研讨挑选：DHA∶HP-β-CD为4∶1；该法得到的包合物载药量可达6.26%，得率达94.03%，较文献报导的得率和载药量均大大进步[4，21]。该工艺操作简洁、设备简略、包合物的载药量和得率高，合适DHA-HP-β-CD包合物的工业化出产。
DHA-HP-β-CD包合物添加了DHA的水溶性，进步了其安稳性和有效性，改进了生物利费用，具有很好的临床医治含义。
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