王连芝 曹玲
[摘要] 意图 树立鼻炎胶囊的定性辨别和含量测定的办法。 办法 用TLC法定性辨别鼻炎胶囊中白芷、川芎；用HPLC法测定细辛中马兜铃酸A含量；Kromasil C18色谱柱；甲醇-1%冰乙酸（60∶40）活动相洗脱；检测波长250 nm。 成果 薄层辨别荧光斑驳明晰，别离度好，阴性对照无搅扰；马兜铃酸A进样量在0.044～0.22 μg规模内峰面积线性关系杰出（r=0.9999）；对两批细辛药材进行检测，其马兜铃酸A含量为34.3 μg/g，并对3批样品进行检测，未检出马兜铃酸A。 定论 所树立的定性、定量测定剖析办法可用于鼻炎胶囊的质量操控。
[关键词] 鼻炎胶囊；质量规范；马兜铃酸A；细辛；白芷；川芎
[中图分类号] R284.1 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2014）01（b）-0008-03
鼻炎胶囊由苍耳子、白芷、川芎、菊花、细辛等九味药材组成，经提取制成的中药复方制剂，具有祛风宣肺、清热解毒等成效，用于医治急慢性鼻炎。为了有用监测该制剂的产品质量，本试验选用TLC法对制剂中的川芎和白芷进行定性辨别；另细辛为本方的首要成分之一，为了操控其毒副效果，本文选用HPLC法对制剂中马兜铃酸A的含量进行查看，为该制剂的质量操控供给理论依据。
1 仪器与试药
Waters2695-2998型高效液相色谱仪；马兜铃酸A对照品、川芎对照药材和白芷对照药材，均购自我国药品生物制品检定所，批号别离为110746-200305， 120918-200608和120945-200406，甲醇为色谱纯，水为重蒸水；硅胶G购自青岛海洋化工有限公司。
2 办法与成果
2.1 川芎的薄层辨别
取本品适量，倾倒出内容物，称取约8 g，置烧瓶中，参加乙醚约50 ml，水浴加热回流提取，时刻约为1 h，提取液滤过，收回滤液至干，残渣加乙醚2 ml使溶解，作为供试品溶液。另制备缺川芎阴性样品，取缺川芎阴性样品5 g，同法制成缺川芎阴性对照溶液。再取川芎对照药材1 g，同法制成川芎对照药材溶液。照薄层色谱法试验，汲取上述三种溶液各6 μl，别离点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（30～60℃）-二氯甲烷（1∶9）为打开剂，打开，取出，晒干，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与川芎对照药材色谱相同的方位上，显相同色彩的荧光斑驳，与缺川芎阴性样品相比较，阴性无搅扰（图1）。
2.2 白芷的薄层辨别
取本品适量，倾倒出内容物，称取约5 g，置三角烧瓶中，参加乙醚30 ml，密塞，悄悄振摇，放置1 h，提取液滤过，收回滤液至干，残渣加乙酸乙酯2 ml使之溶解，作为供试品溶液。另制备缺白芷阴性样品，取缺白芷阴性样品5 g，同法制成缺白芷阴性对照溶液。再取白芷对照药材0.5 g，同法制成白芷对照药材溶液。照薄层色谱法试验，汲取上述三种溶液各10 μl，别离点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（30～60℃）-乙醚（3∶2）为打开剂，打开，取出，晒干，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与白芷对照药材色谱相同的方位上，显相同色彩的荧光斑驳，与缺白芷阴性样品相比较，阴性无搅扰（图2）。
2.3 马兜铃酸A含量查看
2.3.1 色谱条件 Kromasil C18色谱柱（4.6 mm×200 mm，5 μm）；以甲醇-1%冰乙酸（60∶40）为活动相；流速为1.0 ml/min；检测波长250 nm；柱温30℃，理论塔板数按马兜铃酸A峰核算，不低于2000。
2.3.2 供试品溶液的制备 取本品适量，倾倒出内容物，精细称取5 g，置烧瓶中，参加甲醇80 ml，水浴加热回流提取，提取时刻为2 h，提取液滤过，接取滤液，收回滤液至干，残渣加10%氨水20 ml溶解，用乙醚提取3次，每次20 ml，弃去乙醚层，水层滴加稀盐酸，至pH 3～4，再参加乙醚20 ml，分取乙醚层，共提取3次，兼并乙醚液，收回乙醚至干，残渣加甲醇1 ml使之溶解，即为供试品溶液。
2.3.3 对照品溶液的制备 取马兜铃酸A对照品适量，精细称定，加甲醇制成每1 毫升中含马兜铃酸A 0.022 mg的溶液。
2.3.4 规范曲线的制作及线性规模的调查 取上述马兜铃酸A对照品溶液，精细量取2、4、6、8、10 ml，别离置10 ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配制成浓度为0.0044、0.0088、0.0132、0.0176、0.022 mg/ml的溶液，汲取上述系列浓度的对照品溶液10 μl，注入高效色谱仪，按上述色谱条件进行测定。以测得的色谱峰积分面积为纵坐标，以对照品的浓度含量为横坐标，制作规范作业曲线，得线性回归方程Y=2.3183×104X+0.9281×103（r=0.9999），测得马兜铃酸A对照品线性规模为0.044～0.22 μg。
2.3.5 精细度试验 取上述马兜铃酸A对照品溶液（浓度为0.022 mg/ml），精细汲取5 μl，注入高效色谱仪，按上述色谱条件进行测定，重复测定6次，以所得色谱峰峰面积核算RSD为0.23%，标明仪器的精细度杰出。
2.3.6 安稳性试验 取上述马兜铃酸A对照品溶液（浓度为0.022 mg/ml），精细汲取5 μl，别离于0、2、4、6、8、10、12 h注入高效色谱仪，进行测定，按上述色谱条件进行测定，以所得色谱峰峰面积核算RSD为1.52%，标明样品中的马兜铃酸A在12 h内测定，含量安稳。
2.3.7 最低检出限 取上述马兜铃酸A对照品溶液（浓度为0.022 mg/ml），精细汲取1 ml，置25 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，精细汲取20 μl，注入高效色谱仪，进行测定。从20 μl起顺次递减进样量，并记载各色谱图，成果标明当进样量达2 μl时，色谱图信噪比为3∶1，断定最低检出量为2 μl，即含马兜铃酸A对照品为1.76 ng。
2.3.8 细辛药材及样品的马兜铃酸A含量测定 取3批样品按2.3.2项下的办法制备供试品溶液。细辛药材溶液的制备：取细辛药材，精细称取0.2 g，置烧瓶中，参加甲醇20 ml，水浴加热回流提取，提取时刻为2 h，提取液滤过，接取滤液，收回滤液至干，残渣加10%氨水10 ml溶解，用乙醚提取3次，每次10 ml，弃去乙醚层，水层滴加稀盐酸，至pH 3～4，再参加乙醚15 ml，分取乙醚层，共提取3次，兼并乙醚液，收回乙醚至干，残渣加甲醇1 ml使溶解，即得。别离精细汲取马兜铃酸A对照品溶液（浓度为0.022 mg/ml） 5 ml、细辛药材溶液和供试品溶液各10 ml，注入液相色谱仪，测定色谱图见图3～5。对两批细辛药材进行检测，其马兜铃酸A含量为34.3 μg/g，并对三批样品进行检测，未检出马兜铃酸A（表1）。
3 评论
本研讨对鼻炎胶囊制剂中各味药进行了TLC定性辨别，经过试验，断定了川芎、白芷的薄层辨别办法。该办法专特点强，阴性对照无搅扰，能够作为该制剂的辨别办法。川芎辨别试验参阅药典[1]进行辨别，试验过程中发现阴性对照有搅扰。因而，参照文献[2-4]进行了重复试验，最终断定打开剂为石油醚（30～60℃）-二氯甲烷（1∶9），打开效果最好。白芷薄层辨别参照药典[1]进行试验，打开效果好，斑驳明晰。
马兜铃酸是细辛、关木通等马兜铃科植物中的一类硝基菲羧酸类化合物，首要由马兜铃酸A、B、C、D、E及其衍生物组成[5-6]。临床关于马兜铃酸肾危害的报导不断出现，“马兜铃酸肾病”也得到医药界的广泛重视[7-8]。研讨标明，马兜铃酸效果部位在肾小管上皮细胞和肾间质成纤维细胞，其毒性机制首要是导致肾小管上皮细胞的变性、坏死和凋亡， 加快肾间质纤维化进程，下降肾小球滤过率，引起肾衰竭等[9-11]。为有用操控马兜铃酸的肾毒性，有学者选用HPLC法对药材中马兜铃酸A进行了测定[12-14]，参照上述文献办法，本文选用HPLC法测定鼻炎胶囊中马兜铃酸A的含量，来操操控剂的安全性。测定成果标明，细辛药材中马兜铃酸A的含量甚微，约为34.29 μg/g，含细辛药材的三批鼻炎胶囊样品中均未检出马兜酸A。
[参阅文献]
[1] 国家药典委员会.中华公民共和国药典（一部）[M].北京：化学工业出版社，2010：38，97.
[2] 张村，李丽，耿立冬，等.川芎药材有用成分辨别及其含量规范研讨[J].北京中医药大学学报，200，528（2）：66-69.
[3] 郭丽蓉，刘雄伟，周莉玲.跌打止痛微乳喷雾剂质量规范的研讨[J].时珍国医国药，2011，22（5）：1045-1048.
[4] 冯树倩，李映辉.舒胸片中红花及川芎的薄层辨别[J].中医药导报，2010，7（1）：60-61.
[5] 胡志祥，王永红，彭崇胜，等.近5年细辛及其制剂中马兜铃酸的研讨进展[J].中草药，2010，41（2）：318-320.
[6] 黄永芬.重视马兜铃酸对公民健康的危害[J].我国药业，2002，11（8）：16.
[7] 关小彬.警觉含马兜铃酸的中药引起的肾危害[J].新医学，2004，35（5）：305-306.
[8] 史文慧，郭蓉，罗朝利，等.59例马兜铃酸肾病的报导[J].药物流行病学杂志，2008，17（2）：101-103.
[9] 熊静悦，谭正怀.马兜铃酸的首要毒性效果及其相关机制[J].四川中医，2011，29（9）：39-42.
[10] 崔晓红，张兰桐，杨秀岭.马兜铃酸毒性的研讨新进展[J].中草药，2003，34（5）：附7-9.
[11] 王典仁，张中文，陆彦，等.马兜铃酸肾纤维化毒性研讨进展[J].我国兽药杂志，2008，42（1）： 37-40.
[12] 李庆杰，刘永强，常艳茹，等.清脑止痛胶囊中马兜铃酸A定量测定[J].特产研讨，2009，（4）：61-64.
[13] 刘新，林於.细辛中马兜铃酸的HPLC定量测定办法评论[J].中成药，2008，30（6）：896-899.
[14] 苏健，王宝琴，马滕，等.含马兜铃酸中药材与制剂的含量测定办法研讨概述[J]. 我国中医药信息杂志，2005， 12（11）：53-55.
（收稿日期：2013-11-15 本文修改：魏玉坡）
2.3.8 细辛药材及样品的马兜铃酸A含量测定 取3批样品按2.3.2项下的办法制备供试品溶液。细辛药材溶液的制备：取细辛药材，精细称取0.2 g，置烧瓶中，参加甲醇20 ml，水浴加热回流提取，提取时刻为2 h，提取液滤过，接取滤液，收回滤液至干，残渣加10%氨水10 ml溶解，用乙醚提取3次，每次10 ml，弃去乙醚层，水层滴加稀盐酸，至pH 3～4，再参加乙醚15 ml，分取乙醚层，共提取3次，兼并乙醚液，收回乙醚至干，残渣加甲醇1 ml使溶解，即得。别离精细汲取马兜铃酸A对照品溶液（浓度为0.022 mg/ml） 5 ml、细辛药材溶液和供试品溶液各10 ml，注入液相色谱仪，测定色谱图见图3～5。对两批细辛药材进行检测，其马兜铃酸A含量为34.3 μg/g，并对三批样品进行检测，未检出马兜铃酸A（表1）。
3 评论
本研讨对鼻炎胶囊制剂中各味药进行了TLC定性辨别，经过试验，断定了川芎、白芷的薄层辨别办法。该办法专特点强，阴性对照无搅扰，能够作为该制剂的辨别办法。川芎辨别试验参阅药典[1]进行辨别，试验过程中发现阴性对照有搅扰。因而，参照文献[2-4]进行了重复试验，最终断定打开剂为石油醚（30～60℃）-二氯甲烷（1∶9），打开效果最好。白芷薄层辨别参照药典[1]进行试验，打开效果好，斑驳明晰。
马兜铃酸是细辛、关木通等马兜铃科植物中的一类硝基菲羧酸类化合物，首要由马兜铃酸A、B、C、D、E及其衍生物组成[5-6]。临床关于马兜铃酸肾危害的报导不断出现，“马兜铃酸肾病”也得到医药界的广泛重视[7-8]。研讨标明，马兜铃酸效果部位在肾小管上皮细胞和肾间质成纤维细胞，其毒性机制首要是导致肾小管上皮细胞的变性、坏死和凋亡， 加快肾间质纤维化进程，下降肾小球滤过率，引起肾衰竭等[9-11]。为有用操控马兜铃酸的肾毒性，有学者选用HPLC法对药材中马兜铃酸A进行了测定[12-14]，参照上述文献办法，本文选用HPLC法测定鼻炎胶囊中马兜铃酸A的含量，来操操控剂的安全性。测定成果标明，细辛药材中马兜铃酸A的含量甚微，约为34.29 μg/g，含细辛药材的三批鼻炎胶囊样品中均未检出马兜酸A。
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[13] 刘新，林於.细辛中马兜铃酸的HPLC定量测定办法评论[J].中成药，2008，30（6）：896-899.
[14] 苏健，王宝琴，马滕，等.含马兜铃酸中药材与制剂的含量测定办法研讨概述[J]. 我国中医药信息杂志，2005， 12（11）：53-55.
（收稿日期：2013-11-15 本文修改：魏玉坡）
2.3.8 细辛药材及样品的马兜铃酸A含量测定 取3批样品按2.3.2项下的办法制备供试品溶液。细辛药材溶液的制备：取细辛药材，精细称取0.2 g，置烧瓶中，参加甲醇20 ml，水浴加热回流提取，提取时刻为2 h，提取液滤过，接取滤液，收回滤液至干，残渣加10%氨水10 ml溶解，用乙醚提取3次，每次10 ml，弃去乙醚层，水层滴加稀盐酸，至pH 3～4，再参加乙醚15 ml，分取乙醚层，共提取3次，兼并乙醚液，收回乙醚至干，残渣加甲醇1 ml使溶解，即得。别离精细汲取马兜铃酸A对照品溶液（浓度为0.022 mg/ml） 5 ml、细辛药材溶液和供试品溶液各10 ml，注入液相色谱仪，测定色谱图见图3～5。对两批细辛药材进行检测，其马兜铃酸A含量为34.3 μg/g，并对三批样品进行检测，未检出马兜铃酸A（表1）。
3 评论
本研讨对鼻炎胶囊制剂中各味药进行了TLC定性辨别，经过试验，断定了川芎、白芷的薄层辨别办法。该办法专特点强，阴性对照无搅扰，能够作为该制剂的辨别办法。川芎辨别试验参阅药典[1]进行辨别，试验过程中发现阴性对照有搅扰。因而，参照文献[2-4]进行了重复试验，最终断定打开剂为石油醚（30～60℃）-二氯甲烷（1∶9），打开效果最好。白芷薄层辨别参照药典[1]进行试验，打开效果好，斑驳明晰。
马兜铃酸是细辛、关木通等马兜铃科植物中的一类硝基菲羧酸类化合物，首要由马兜铃酸A、B、C、D、E及其衍生物组成[5-6]。临床关于马兜铃酸肾危害的报导不断出现，“马兜铃酸肾病”也得到医药界的广泛重视[7-8]。研讨标明，马兜铃酸效果部位在肾小管上皮细胞和肾间质成纤维细胞，其毒性机制首要是导致肾小管上皮细胞的变性、坏死和凋亡， 加快肾间质纤维化进程，下降肾小球滤过率，引起肾衰竭等[9-11]。为有用操控马兜铃酸的肾毒性，有学者选用HPLC法对药材中马兜铃酸A进行了测定[12-14]，参照上述文献办法，本文选用HPLC法测定鼻炎胶囊中马兜铃酸A的含量，来操操控剂的安全性。测定成果标明，细辛药材中马兜铃酸A的含量甚微，约为34.29 μg/g，含细辛药材的三批鼻炎胶囊样品中均未检出马兜酸A。
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[5] 胡志祥，王永红，彭崇胜，等.近5年细辛及其制剂中马兜铃酸的研讨进展[J].中草药，2010，41（2）：318-320.
[6] 黄永芬.重视马兜铃酸对公民健康的危害[J].我国药业，2002，11（8）：16.
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[8] 史文慧，郭蓉，罗朝利，等.59例马兜铃酸肾病的报导[J].药物流行病学杂志，2008，17（2）：101-103.
[9] 熊静悦，谭正怀.马兜铃酸的首要毒性效果及其相关机制[J].四川中医，2011，29（9）：39-42.
[10] 崔晓红，张兰桐，杨秀岭.马兜铃酸毒性的研讨新进展[J].中草药，2003，34（5）：附7-9.
[11] 王典仁，张中文，陆彦，等.马兜铃酸肾纤维化毒性研讨进展[J].我国兽药杂志，2008，42（1）： 37-40.
[12] 李庆杰，刘永强，常艳茹，等.清脑止痛胶囊中马兜铃酸A定量测定[J].特产研讨，2009，（4）：61-64.
[13] 刘新，林於.细辛中马兜铃酸的HPLC定量测定办法评论[J].中成药，2008，30（6）：896-899.
[14] 苏健，王宝琴，马滕，等.含马兜铃酸中药材与制剂的含量测定办法研讨概述[J]. 我国中医药信息杂志，2005， 12（11）：53-55.
（收稿日期：2013-11-15 本文修改：魏玉坡）
