张美玲+陈彦杰+赵亭+褚银铃+张洁+房艳+贾德贤
[摘要]意图 树立高效液相色谱一起测定“改进睡觉颗粒”中天麻素、红景天苷、栀子苷和斯皮诺素含量的办法。办法 检测目标为以上说到的“改进睡觉颗粒”中的四个主要成分。选用的色谱柱为Thermo Fisher Syncronis C18（250 mm × 4.6 mm，5 μm）；活动相为乙腈-水，梯度洗脱，流速为1.0 ml/min；柱温为30℃，进样量为10 μl。检测波长别离设定为220、238、275、335 nm。成果 天麻素、红景天苷、栀子苷和斯皮诺素别离在0.8032～4.0160、0.5392～2.6960、2.6916～13.4580、0.2112～1.0560 μg范围内线性关系杰出；精细度、稳定性、重复性试验的均RSD<2.00%；加样回收率别离为98.17%、99.37%、98.84%、99.27%；RSD别离为0.67%、0.48%、0.49%、0.93%。定论 高效液相色谱法可一起测定“改进睡觉颗粒”中天麻素、红景天苷、栀子苷和斯皮诺素的含量，且该办法简洁、精确，可用于该制剂的质量操控。
[关键词]改进睡觉颗粒；高效液相色谱；天麻素；红景天苷；栀子苷；斯皮诺素
[中图分类号] R927.2 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2016）12（b）-0011-04
The application of simultaneous determination of Gastordine，Salidroside，Geniposide and Spinosin in “Gaishanshuimian Granules” by HPLC
ZHANG Mei-ling CHEN Yan-jie ZHAO Ting CHU Yin-ling ZHANG Jie FANG Yan JIA De-xian
Ovation Health Science and Technology Co.Ltd.，ENN Group，Langfang 065001，China
[Abstract]Objective To establish an HPLC method for simultaneous determination of four constituents （Gastordine，Salidroside，Geniposide，Spinosin） in “Gaishanshuimian Granules”.Methods Aforementioned four major constituents in “Gaishanshuimian Granules” as the detecting subject.Column was Thermo Fisher Syncronis C18 （250 mm×4.6 mm，5 μm）.Mobile phase was acetonitrile-water，gradient elute，flow rate was 1.0 ml/min.Column temperature was maintained at 30℃，sample size was 10 μl.Detection wavelengths were set at 220，238，275 and 335 nm.Results Linear range of Gastordine，Salidroside，Geniposide，and Spinosin respectively were 0.8032-4.0160，0.5392-2.6960，2.6916-13.4580，0.2112-1.0560 μg.The RSD of precision，stability and repeatability test were all less than 2.00%.The average recoveries respectively were 98.17%，99.37%，98.84% and 99.27% with RSD of 0.67%，0.48%，0.49% and 0.93%，respectively.Conclusion This developed HPLC method is reliable and convenient for simultaneous determination of Gastordine，Salidroside，Geniposide，and Spinosin，which could be applied to determine contents of four constituents and quality control of "Gaishanshuimian Granules".
[Key words]Gaishanshuimian Granules；HPLC；Gastordine；Salidroside；Geniposide；Spinosin
睡觉對人是必不可少的歇息办法，通过睡觉使疲惫的神经细胞康复正常的生理功能，精力和膂力得到康复。但是，跟着社会的快速开展及生存环境的改变，具有睡觉方面妨碍的人数量越来越多。睡觉妨碍严重影响着人们的身心健康、日子质量和工作效率。“改进睡觉颗粒”由天麻、酸枣仁、红景天及栀子等中药组成，是新绎健康科技有限公司根据临床经验方加减，开发为具有改进睡觉效果的保健食物。方中天麻为君药，酸枣仁为臣药，天麻具有冷静催眠、镇痛、益智等效果[1]，天麻素是天麻的主要成分，具有多种药理效果，包含神经衰弱综合症、阿尔茨海默病综合症、帕金森病等[2-4]。酸枣仁具有冷静催眠、镇痛、抗血小板集合等效果[5-6]。斯皮诺素为黄酮碳苷类成分，是酸枣仁主要成分之一，现代药理研讨标明能明显增强戊巴比妥诱导的睡觉，表现在睡觉时刻添加和睡觉潜伏期削减，其效果机制可能与拮抗5-HT（1A）受体有关[7-8]。藏药红景天是我国宝贵的药材，享有“高原人参”的美誉，红景天除用于医治高原反响，近年研讨标明具有抗肿瘤、抗氧化、抗疲惫、医治心血管疾病及神经系统疾病等[9]，主要成分红景天苷是研讨的热门，已报导的药理效果有抗疲惫、抗衰老、免疫调节、铲除自由基、增强回忆、改进睡觉等[10-11]。栀子为药食两用的物品，不仅在中医临床中常常运用，在食物与保健食物中也运用广泛，现代药理研讨标明，栀子具有保肝利胆、降压、镇痛、冷静等效果[12]，其主要活性成分是栀子苷和栀子黄色素，栀子苷也出现多种药理效果[13]。根据以上剖析，本试验选用HPLC办法一起测定“改进睡觉颗粒”中天麻素、红景天苷、栀子苷及斯皮诺素四个主要成分的含量，能够较好的反响该制剂的效果物质基础，为其质量操控研讨供给参阅。
1资料
1.1仪器和设备
Thermo Ultimate 3000双三元高效液相色谱仪[（DGLC），美国赛默飞世尔公司]；十万分之一剖析天平（瑞士 Mettler-Toledo公司）；KQ250DB型超声波清洗仪（昆山市超声波仪器有限责任公司）。
1.2药品与试剂
“改进睡觉颗粒”及其提取物中间体均为新奥集团新绎健康科技有限公司供给。天麻素、红景天苷、栀子苷、斯皮诺素对照品均购自于北京欣荣科技有限公司（批号别离为150708、150619、150612、150807）。乙腈为色谱纯，水为高纯水；除还有规则外，其他试剂均为剖析纯。
2办法与成果
2.1色谱条件
色谱柱：Thermo Fisher Syncronis C18（250 mm × 4.6 mm，5 μm）色谱柱，以乙腈（A）-水（B）为活动相，洗脱梯度为0～3 min，6%A；3～13 min，6%～18%A；13～22 min，18%～40%A；22～23 min，40%～6%A；23～30 min，6%A。流速1.0 ml/min，柱温25℃，进样量10 μl。按上述色谱条件，各成别离离度杰出，测定成果见图1和图2。
2.2溶液制备
2.2.1对照品溶液制备 精细称取对照品适量，置入10 ml量瓶中，用甲醇溶解定容，制造浓度别离为天麻素200.8 μg/ml、红景天苷134.8 μg/ml、栀子苷672.9 μg/ml、斯皮诺素52.8 μg/ml的混合对照品溶液。
2.2.2 供试品溶液制备 取“改进睡觉颗粒”提取物中间体及小试颗粒各0.5 g，精细称定，置具塞锥形瓶中，精细参加水25 ml，称定分量，超声处理（功率100 W，频率45 kHz）40 min，放冷，再称定分量，用水补足减失的分量，摇匀，微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
2.3 线性关系调查
别离精细汲取混合对照品溶液4、8、12、16、20 μl注入高效液相色谱仪，依照“2.1”项下色谱条件进样测定，记载各成分峰面积。以进样量（μg）为横坐标（x），峰面积值为纵坐标（y）进行线性回归，得各成分的回归方程（表1）。
2.4精细度试验
取“2.1”项下制备的混合对照品溶液，接连测定6次，记载各成分峰面积。成果，天麻素、红景天苷、栀子苷和斯皮诺素峰面积的RSD别离为0.50%、0.23%、0.20%和0.23%，标明仪器的精细度杰出。
2.5稳定性试验
精细汲取“2.2”项下制备的样品溶液各20 μl，别离在装备后0、2、4、8、12、24 h进样测定，记载各成分峰面积。成果标明天麻素、红景天苷、栀子苷和斯皮诺素峰面积的RSD别离为1.94%、0.59%、0.75%和1.64%，标明对照品溶液和供试品溶液在24 h内稳定性杰出。
2.6 重复性试验
取同一批小試颗粒样品6份，按“2.2”项下办法操作制备供试品溶液，进样测定，记载各成分峰面积，成果标明天麻素、红景天苷、栀子苷和斯皮诺素峰面积的RSD别离为0.70%、0.45%、0.67%和1.48%，标明该办法重复性杰出。
2.7加样回收率试验
精细称取同法测定的已知含量小试颗粒样品共6份，别离精细参加混合对照品适量，按“2.2”项下的办法制备样品溶液，记载各成分峰面积，经核算成果如表2，回收率在98.0%～99.5%，标明本法精确度较好。
2.8样品含量的测定
取一批小试颗粒和四种提取工艺下的提取物中间体。按“2.2.2”项下进行溶液制备，平行制备3份。按“2.2.1”项下的色谱条件进行测定，记载峰面积并核算含量，成果见表3。
本试验断定的办法一起测定样品（四种工艺下制备的复方提取物及小试颗粒样本）中天麻素、红景天苷、栀子苷及斯皮诺素的含量进行了测定，四种成分都能检出，而且能够彻底别离，阐明此法能够辅导提取工艺的优化及样品的质量操控。
3评论
3.1提取溶剂的挑选
供试品制备过程中，根据目标性成分的性质，挑选甲醇、60%甲醇、30%甲醇和水为提取溶剂，超声提取40 min，发现甲醇浓度越高不溶物越多。水为溶剂时提取溶液较弄清，各成分能到达有用别离，且各成分的提取率最高，故终究挑选水作为提取溶剂。
3.2 检测波长的挑选
根据《我国药典》2015年版天麻、栀子、红景天和酸枣仁项下的规则，天麻素、红景天苷、栀子苷和斯皮诺素的最大吸收波长别离为220、238、275、335 nm[14]，因而，别离在以上波长下积分核算峰面积，确保成果的精确性。
3.3 活动相的挑选
天麻素、栀子苷、红景天苷和斯皮诺素在《我国药典》2015年版中各成分测定的色谱条件中活动相除红景天苷运用甲醇-水外，其他都是乙腈-水；水相只要测定天麻素时是0.05%磷酸水溶液，一起也参阅了文献报导的液相条件[15-18]，断定本试验中一起测定这四种成分含量的活动相为乙腈-水。通过探索断定合适的洗脱程序，各成分峰型杰出，且别离度均>1.5。本文断定的一起测定“改进睡觉颗粒”中天麻素、红景天苷、栀子苷及斯皮诺素含量的HPLC办法，样品制备办法简略，别离效果杰出，专特点强、精细度高、重复性较好，为提取工艺的断定供给根据，为“改进睡觉颗粒”质量标准的拟定供给参阅。
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