陈志平+王岚枫+胡蓉
＼[摘要]意图 剖析THP-1巨噬细胞中过表达GPR119对脂质代谢相关基因表达的影响。办法 构建过表达GPR119载体，转染THP-1细胞，用佛波酯（160 nmol/L，48 h）分化成巨噬细胞。NC组：空载体转染THP-1+Dil-oxLDL（50 μg/ml）48 h；GPR119（H）组：过表达GPR119转染THP-1+Dil-oxLDL（50 μg/ml）48 h。检测过表达GPR119转染THP-1巨噬细胞后脂质代谢相关基因表达。成果 过表达GPR119组SR-B1、APOE、LCAT基因表达明显高于NC组表达（P=0.000）。定论 过表达GPR119能引起脂质代谢相关基因表达改变。
[关键词]GPR119；脂质代谢；基因表达；THP-1巨噬细胞
[中图分类号] R446.1 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2017）01（c）-0138-03
[Abstract]Objective To investigate the effects of overexpression of GPR119 on expression of genes related to lipid metabolism in THP-1 macrophages.Methods expression vector GPR119，and transfected into THP-1 cells with phorbol ester （160 nmol/L，48 h） to differentiate into macrophages were constructed.NC group：the empty vector transfected into THP-1 Dil-oxLDL （50 g/ml） 48 h；GPR119 （H） group：over expression of GPR119 transfected with THP-1 Dil-oxLDL （50 g/ml） 48 h.detection of lipid metabolism related genes expression in GPR119 transfected macrophages after THP-1.Results The expression of GPR119 in group SR-B1，APOE，LCAT gene expression were significantly higher than those of control group （P=0.000）.Conclusion Over expression of GPR119 can cause changes in the expression of genes related to lipid metabolism.
[Key words]GPR119；Lipid metabolism；Gene expression；THP-1 macrophage
GPR119是一个新的可能参加调理体内脂质代谢的膜受体[1-2]。GPR119归于G蛋白偶联受体A宗族，有7个跨膜区，在胞浆内与三个亚单位（α、β、γ）所组成的G蛋白偶联，首要表达在胰島和胃肠道细胞[3-4]。人源性GPR119的基因定坐落Xq26.1，该基因的敞开阅览结构仅有一个外显子，不含内含子，编码335个氨基酸。GPR119在医治2型糖尿病及肥壮的效果有比较深化的研讨，并提示GPR119可能参加脂质代谢[5-8]。本文旨在评论GPR119是否参加脂质代谢，研讨过表达GPR119后脂质代谢相关基因的表达。
1材料与办法
1.1细胞培育
THP-1细胞从American Type Culture Collection （ATCC，Manassas，VA，USA）取得，用RPMI-1640培育基培育，RPMI-1640培育基包括10%胎牛血清和1%青霉素/链霉素，培育环境为37°C，5%CO2。细胞被栽培于6孔板或12孔板或60 mm平皿，而且成长到铺满平皿达80%～90%时待用。NC组：空载体转染THP-1+Dil-oxLDL（50 μg/ml）48 h；GPR119（H）组：过表达GPR119转染THP-1+Dil-oxLDL（50 μg/ml）48 h。
1.2首要仪器与试剂
CO2培育箱（美国Thermo公司）；超净工作台（美国Thermo公司）；7500 Fast荧光定量仪（美国ABI公司）；胎牛血清（四季青公司）；Lipofectamine 2000（美国Invitrogen公司）；Primescript RRT Enzyme MixI和SYBRRPremix Ex TaqTMII等基因检测试剂（购自Takara公司）。
1.3转染
Lipofectamine 2000过表达GPR119，转染THP-1细胞（按美国Invitrogen公司说明书操作），用佛波酯（160 nmol/L，48 h）分化成巨噬细胞。
1.4基因检测
THP-1巨噬细胞PBS清洗3遍，提取总RNA，并将mRNA回转录成cDNA。反响条件为：37℃下15 min，85℃下5 s（表1）。
按试剂说明书操作ABI 7500 Fast Real-Time RCR System，反响条件为：95℃下预变性30 s，95℃下5 s，60℃下34 s，40次循环后别离（表2）。
一切标本均于同一反响系统中进行，每份重复检测3次。
1.5检测目标
检测过表达GPR119转染THP-1巨噬细胞后脂质代谢相关基因清道夫B1（SR-B1）、载脂蛋白E（APOE）及卵磷脂胆固醇酰基搬运酶（LCAT）表达。
1.6统计学剖析
选用SPSS 13. 0统计学软件对数据进行处理，计量材料选用均数±标准差（x±s）标明，选用t查验，以P<0.05为差异有统计学含义。
2成果
选用实时定量PCR测定过表达GPR119后THP-1巨噬细胞中SR-B1、APOE及LCAT表达，成果标明，与NC组比较，GPR119（H）组SR-B1、APOE及LCAT表达明显升高（P<0.01）（表3）。
3评论
本研讨标明，过表达GPR119后THP-1巨噬细胞中SR-B1、APOE、LCAT表达明显上调（P=0.000）。SR-B1是一个多配体受体，能在高密度脂蛋白（HDL）与细胞间介导双向脂质转运，能够在动脉粥样硬化斑块的巨噬细胞中表达，对肝脏胆固醇的逆向转运和抗动脉粥样硬化都是有必要的。SR-B1敲除鼠可导致快速的冠状动脉阻塞、心肌梗死、心功能下降和逝世，提示SR-B1关于脂质调理和抗动脉粥样硬化起重要效果[9]。APOE是血浆中脂蛋白的重要组成成分，在脂质代谢中起着重要效果，APOE经过不同机制对动脉粥样硬化起必定抑制效果[10]。LCAT是一种血浆中起催化效果的酶，其效果是将HDL的卵磷脂的C2位不饱和脂肪酸搬运给游离胆固醇，出产溶血卵磷脂和胆固醇酯，在脂质代谢中发挥重要效果[11-12]。
GPR119在医治2型糖尿病及肥壮的效果已有比较深化的研讨。GPR119与激动剂结合后，经过cAMP信号转导途径，促进葡萄糖依赖性胰岛素和肠肽激素的排泄，是医治2型糖尿病和肥壮症的药物靶点[13-14]。最新研讨标明，GPR119在APOE敲除鼠中下降血清脂质和炎症因子，可能成为动脉粥样硬化的医治靶点[15-17]。
本研讨提示，GPR119在巨噬细胞脂质代谢平衡中发挥重要效果，直接参加对肝脏胆固醇的逆向转运，可能为动脉粥样硬化的防治供给新的医治靶点。
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（收稿日期：2016-12-22 本文修改：顾雪菲）
