白云龙 王建杰
【摘要】意图 讨论TLRs信号通路对乳腺癌细胞株PD-L1表达的调控作用。办法 用western blotting检测乳腺癌MCF7细胞株与MDA-MB-231细胞株PD-L1蛋白的表达；选用tolls样受体特异性激动剂LPS和阻断剂TAK-242影响乳腺癌细胞后检测两株乳腺癌细胞PD-L1、STAT3转录因子、STAT3的表达状况；构建靶向STAT3的siRNA和STAT3质粒转染MCF-7和MDA-MB-231细胞后检测PD-L1的表达状况。成果 用LPS激活TLRs后，MCF-7和MDA-MB-231细胞株的PD-L1表达别离升高1.5倍和2.4倍；用TAK-242按捺TLR后，MCF-7细胞中PD-L1表达下调1.7倍，而MDA-MB-231的PD-L1的表达量无明显改变；用LPS激活TLRs后，MCF-7和MDA-MB-231细胞株的STAT-3表达别离升高1.5倍和2.4倍；用TAK-242按捺TLR后，MCF-7细胞中STAT-3表达下调1.7倍，而MDA-MB-231的STAT-3的表达量无明显改变。定论 本研讨证明TLRs经过STAT3信号通路对PD-L1进行调控，为联合干涉TLRS和PD-L1按捺肿瘤免疫躲避，进步乳腺癌治愈率据。
【关键词】乳腺癌；免疫躲避；TLRs；PD-L1；STAT3
【中图分类号】R737.9 【文献标识码】B 【文章编号】ISSN.2095.6681.2018.06.17..02
免疫系统对肿瘤细胞具有监督和杀伤作用，而肿瘤则可经过多种免疫逃逸机制反抗或躲避免疫系統对肿瘤细胞的杀伤和铲除，三阴性乳腺癌和孕激素/雌激素受体阳性乳腺癌是否经过调控程序性逝世受体1配体（PD-L1）介导肿瘤细胞免疫躲避不清楚[1-2]，本研讨将经过探究TLRs信号通路对乳腺癌细胞株PD-L1表达的调控机制，研讨PD-L1和TLRs的调控联系，进步乳腺癌治愈率供给根据。
1 材料与办法
1.1 细胞株与首要试剂
乳腺癌细胞株MCF-7与MDA-MB-231细胞株购自诺辰生物公司；胎牛血清购自澳大利亚clark公司；L15和RPMI-1640培育基购自gibco公司；TAK-242 TLR4按捺剂购自APEXBIO公司；LPS、TLR4样受体激活剂购自碧云天公司；抗PD-L1，STAT3兔源多克隆抗体购自成都正能生物技术公司；抗PD-L1鼠源单克隆抗体购自sigama公司；STAT3 siRNA搅扰质粒由上海吉凯基因公司组成。
1.2 Western Blotting
细胞长满培育瓶壁，预冷PBS冲刷，参加含蛋白酶按捺剂的细胞裂解液裂解，离心，取上清，参加buffer，电泳；半干式转膜，脱脂乳关闭，孵育过夜，二抗孵育，上机检测。
1.3 细胞转染
将两株细胞别离接种于六孔板中，分为无任何处理组、STAT3过表达组、siRNA-STAT3组、无义siRNA组、空载体质粒组，脂质体3000转染，48小时后制造检测样品，上机检测。
1.4 统计学处理
Western blotting均重复三次，随后的各组试验成果取平均值，核算各组数据的规范差、规范误。计量材料两组比较用配对样本t查验、两样本t查验和多样本的LSD-t查验，P<0.05表明有统计学含义。
2 结 果
2.1 TLRs促进乳腺癌细胞PD-L1表达
MDA-MB-231细胞PD-L1的表达量高于MCF-71.9倍（P<0.01），用LPS激活TLRs时，MCF-7细胞膜上PD-L1表达量上调1.5倍（P<0.01），MDA-MB-231细胞膜上PD-L1表达量上调2.4倍（P<0.01）；用TAK-242按捺TLRs时，MCF-7细胞膜上PD-L1表达水平则下调1.7倍（P<0.05），MDA-MB-231细胞无明显改变。
2.2 STAT3是TLRs的下流转录因子
MDA-MB-231中STAT3的表达量高于MCF-72.2倍（P<0.01）；用LPS处理MCF-7细胞中STAT3表达水平3.1倍（P<0.001），进步MDA-MB-231细胞中STAT3表达水平1.9倍（P<0.01）；而TAK-242处理则下调了MCF-7细胞中STAT3表达水平1.6倍（P<0.01），MDA-MB-231细胞改变不明显。
2.3 TLRs经过STAT3信号通路促进乳腺癌细胞PD-L1表达
在MCF-7和MDA-MB-231细胞中选用STAT3 siRNA敲减STAT3表达及用STAT3质粒升高STAT3表达；成果发现敲减STAT3可削减MCF-7细胞STAT3表达4.4倍（P<0.01），STAT3质粒升高则1.9倍（P<0.05）；敲减STAT3削减MDA-MB-231细胞STAT3表达2.8倍（P<0.001），敲减STAT3可别离削减MCF-7和MDA-MB-231细胞膜上PD-L1表达水平2.2倍和4.2倍（P<0.001）；反之高表达STAT3则别离进步5.2倍和3.8倍（P<0.001）。
3 讨 论
免疫系统对肿瘤细胞具有监督和杀伤作用，而肿瘤则可经过多种免疫逃逸机制反抗或躲避免疫系统对肿瘤细胞的杀伤和铲除[3-4]。从本试验成果来看，用LPS影响后PD-L1的表达均上调，PD-L1的表达添加与下降是跟着STAT3的表达改变而改变的，证明STAT3是PD-L1的转录因子；TLRs信号通路能够经过STAT3上调PD-L1的表达来介导肿瘤免疫逃逸，本研讨成果证明三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231的PD-L1蛋白的表达量要高于孕激素/雌激素受体阳性乳腺癌细胞株MCF-7细胞株，证明PD-L1与TLRs信号通路的密切联系。本研讨初次在乳腺癌中发现了TLRs经过STAT3信号通路对PD-L1的表达调控作用，为联合干涉TLRS和PD-L1按捺肿瘤免疫躲避，进步乳腺癌医治作用供给了科学根据。
参考文献
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本文修改：吴 卫
