周松林等
[摘要] 意图 给脂溶性的抗肿瘤药物挑选高溶解性、低细胞毒性的有机溶剂。 办法 选用MTT法，依照不同纯度，对8种能溶于水的有机溶剂，测验其对黑色素瘤B16、人胃癌细胞SGC-7901两种细胞株的细胞毒性。 成果 不同有机溶剂对不同细胞株的按捺皆不同，甲醇与丙酮对两种细胞株的毒性相对都较弱，纯度越高的有机溶剂对细胞毒害越小。 定论 光谱纯的甲醇与丙酮是脂溶性抗肿瘤药物有用的有机溶剂。
[关键词] MTT；细胞毒性；有机溶剂；纯度
[中图分类号] R915 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2015）02（b）-0144-03
Inhibitory effect of different purity organic solvents on two tumor cells
ZHOU Song-lin LIN Ying-ying ZHAO Huan-ge HUANG Yong-hao
Key Laboratory of Tropical Medicine，Hainan Medical College，Haikou 571199，China
[Abstract] Objective To select organic solvents with low cytotoxicity for dissolve some compounds which had bad water-solubility in screening antitumor agent compound. Methods The cytotoxic effect of 8 organic solvents both can dissolve in water and fat soluble organic solvents with different purity on two tumor cell lines（B16 and SGC-7901）were tested by MTT. Results Different organic solvents inhibit different cell lines were different，the effect of methanol and acetone toxicity on two kinds of cell lines were relatively weak.The higher the purity of the organic solvent on two tumor cell had low toxicity. Conclusion The spectrum class pure methanol and acetone are effective organic solvent of fat-soluble anticancer drugs.
[Key words] MTT；Cytotoxicity；Organic solvents；Purity
在体外挑选抗肿瘤药物时，常碰到被挑选的药物不能溶于细胞培育液中，这需求凭借有机溶剂才干溶解，因此，溶解样品的有机溶剂既要能较好地溶解药品，使之溶于培育液中，又需求在必定的浓度范围内对供试细胞株毒性尽可能小。这样低细胞毒害的溶剂才不会对药物的抗肿瘤效果发生假阳性。虽然有不少文献报导不同的溶剂对不同的细胞毒害都不相同[1-5]，但这些文献很少触及不同纯度有机溶剂对细胞毒害的效果，且不少文献触及有些不溶于水的有机溶剂，因此，本文经过比较几种常见溶于水的剖析纯和光谱纯的有机溶剂，来测验对2株常见的细胞黑色素瘤B16和人胃癌细胞SGC-7901的毒害效果。
1 资料与办法
1.1 肿瘤细胞系
黑色素瘤细胞B16、人胃癌细胞SGC-7901，从中国科学院上海药物研讨所肿瘤细胞库引入，并在本室长时刻传代培育。
1.2 试剂与药物
RPMI-1640培育基，Gibco公司；MTT，Sigma公司；重生小牛血清，杭州四季青公司；甲醇、乙腈、四氢呋喃（THF）、二甲亚砜（DMSO）、丙酮、乙醇、甘油、异丙醇、剖析纯（analytical pure，AR）的为国产剖析纯，光谱纯（spectrum pure，SP）购自美国六合公司；二氧化碳培育箱，Heroes公司；酶标仪，美国Biotech公司。
1.3 细胞毒试验
选用MTT法进行测验[6-7]，取对数成长时刻的B16、SGC-7901细胞株，调整细胞浓度为5×103/ml，参加96孔板中，180 μl/孔。细胞在培育箱中放置4 h待贴壁后再加待测溶剂，每孔别离参加不同体积的溶剂（1.0、2.0、5、10、15、20 μl），然后再参加细胞培育也补齐200 μl/孔的体积，阴性对照为等体积的细胞培育液，37 ℃、5% CO2培育箱中孵育36 h后，别离参加MTT 5 mg/ml，20 μl/孔，持续培育4 h后，悄悄吸去上层清液，再向每孔参加150 μl DMSO溶解蓝紫结晶甲瓒，用酶标仪在540 nm波长下测定各孔的OD值，试验重复3次。
2 成果
2.1 有机溶剂对B16细胞增殖的按捺率
8种不同纯度的有机溶剂对B16的毒害效果见表1，其间光谱纯的丙酮对B16的损伤最小，IC50的按捺体积分数为11.05%，其次是光谱纯的甲醇，毒性最大的是剖析纯DMSO。当溶剂的体积分数为5.0%时，甲醇、丙酮对细胞的均无显着毒害效果。
表1 不同有机溶剂对黑色素瘤B16的毒害效果（%）
“-”表明无显着按捺
2.2 有机溶剂对SGC-7901细胞增殖的按捺率
8种有机溶剂对SGC-7901的毒害效果见表2，其间光谱纯乙腈的毒害效果最小，其IC50体积分数为9.93%；其次为色谱纯的甲醇IC50为9.88%，甘油对SGC-7901细胞毒害最大，当溶剂的体积分数为2.5%时，只要光谱纯的甲醇和丙酮对细胞损伤不显着。
表2 不同有机溶剂对人胃癌细胞SGC-7901的毒害效果（%）
“-”表明无显着按捺
3 评论
3.1 不同溶剂对同一细胞株具有不同的细胞毒效果
在所测验的8种有机溶剂中，光谱纯的甲醇和丙酮对两种肿瘤供试细胞株毒性都比较弱，在对B16细胞毒害试验中，其光谱纯甲醇、THF、丙酮和剖析纯的丙酮等4种溶剂的IC50均>9%，剖析纯DMSO的IC50体积分数却只要1.41%。在SGC-7901细胞毒害试验中，色谱纯的甲醇和乙腈的IC50的体积分数均>9%，但IC50的体积分数<2%的有剖析纯的THF、DMSO，因此，不同有机溶剂对某一细胞株的毒害皆不相同。
3.2 同一溶剂对不同细胞株具有不同细胞毒效果
相同的溶剂对不同细胞株的毒害也有显着不同，如乙腈和四氢呋喃在两种细胞株体现的不同，光谱纯乙腈和剖析纯的乙腈对B16的IC50仅为2.44%和2.19%，而对SGC-7901的IC50为9.93%和8.05%；THF与丙酮对二株细胞系的IC50相差也比较大，只要色谱纯的甲醇对两株细胞毒害相差不大，因此，同一溶剂对不同细胞株是其毒害效果也不相同。
3.3 不同纯度溶剂对同一细胞株有不同细胞毒效果
不同纯度的溶剂细胞株的毒害也不相同，光谱纯与剖析纯的甲醇对B16和SGC-7901的毒害IC50体积分数相差都约1.5倍，色谱纯与剖析纯的DMSO对B16的毒害IC50体积分数相差2.6倍，对SGC-7901的IC50体积分数相差2.7倍，试验得出，光谱纯的有机溶剂显着比剖析纯的有机溶剂在同一浓度下对细胞毒害小。
在已报导的研讨成果中，有报导甲醇、丙酮、甘油、乙醇和DMSO对某一细胞株体现出最低细胞毒性[1-5，8-12]，这是由于不同试验中所选的细胞株不同，而同一种有机溶剂对不同细胞株体现的毒性不同；也可能是有机溶剂购买的时刻较长，形成溶剂的纯度发生了改动，因此体现出不同的细胞毒性。在挑选抗肿瘤药物时，有必要先对已有的有机溶剂测验其对所测验细胞系的细胞毒害试验，再挑选适宜的有机溶剂，且在试验过程中尽量购买纯度高、新鲜的溶剂来溶解药品，削减试验差错，还需求考虑的是，在一些有色彩的样品中，色彩的改变也对MTT有很大的影响[12]。
[参考文献]
[1] 纪舒昱，翁稚颖，周轶平，等.8种有机溶剂对肿瘤细胞的细胞毒效果[J].云南大学学报（自然科学版），2001，23（6）：457-460.
[2] 王振斌，马海乐，许文荣，等.有机溶剂对肿瘤细胞的细胞毒效果[J].江苏大学学报（医学版），2005，15（3）：201-204.
[3] 王文娟，雒向宁，马晓军，等.8种有机溶剂对人肝癌细胞HepG2及SMMC7721的细胞毒效果[J].现代中医药，2013，33（4）：85-86.
[4] 刘琦，谢锦艳，冯改利，等.不同有机溶剂对人胃癌SGC-7901和结肠癌HT29细胞的细胞毒效果[J].陕西中医，2014，35（5）：601-603.
[5] 王庆利，何丹，郑晓冬，等.有机溶剂对细胞的毒害及细胞的耐受性机制[J].微生物学通报，2002，29（4）：81-85.
[6] 罗奇志，林琳，王芙艳，等.MTT办法的优化[J].激光生物学报，2014，23（3）：279-282.
[7] 司徒镇强，吴军正.细胞培育[M].西安：国际图书出版公司，2004：199.
[8] 吴兆亮，胡滨，郑辉杰，等.两液相培育中有机溶剂对细胞毒性的研讨进展[J].生物技术，2000，10（2）：37-40.
[9] 宋凤艳.肿瘤细胞ECA109对甲醇等4种有机溶剂耐受剂量剖析[J].井冈山大学学报（自然科学版），2014，35（5）：88-93.
[10] 宋凤艳.肿瘤细胞ECA109和PC12对二甲基亚枫耐受剂量的剖析[J].科学技术与工程，2013，13（14）：27-32.
[11] 吴迪，巴哈尔古丽·卡哈尔，吴桂荣.溶媒二甲基亚砜对细胞成长与生机的影响研讨[J].新疆医科大学学报，2010，33（5）：489-491.
[12] 陈艳华，黎丹戎，侯华新，等.不同溶剂和受试物色彩对MTT试验的影响[J].广西医科大学学报，2007，24（1）：17-19.
（收稿日期：2015-01-04 本文修改：李亚聪）
