冯秀美+丁昌俊
[摘要]意图 觀察口服孟鲁司特联合沙美特罗替卡松吸入医治对支气管哮喘患者体内辅助性T（Th）17细胞相关细胞因子转化生长因子-β（TGF-β）、白细胞介素（IL）-17和IL-23表达的影响。办法 将2014年10月～2016年4月在本院住院及门诊就诊确诊为支气管哮喘的60例患者依照不同的医治办法分为惯例医治组20例和孟鲁司特联合沙美特罗替卡松组40例，一起归入健康对照组20例。别离于入院或门诊就诊医治后3个月选用ELISA法检测一切患者空腹血清及痰培育上清中Th17细胞相关细胞因子TGF-β、IL-17和IL-23表达的改动。成果 与健康对照组比较，哮喘患者血清及痰培育上清中TGF-β、IL-17和IL-23表达显着升高，差异有计算学含义（P<0.01）。医治后3个月，两组患者TGF-β、IL-23表达水平较医治前显着下降（P<0.05）；与惯例医治组比较，孟鲁司特联合沙美特罗替卡松组血清TGF-β、IL-23表达水平下降更为显着（P<0.05）。两组患者血清和痰培育上清中IL-17表达水平医治前后无显着改动（P>0.05）。定论 Th17细胞相关细胞因子参加哮喘的发病；孟鲁司特联合沙美特罗替卡松医治可显着下降支气管哮喘患者Th17细胞相关细胞因子的表达。
[要害词]支气管哮喘；Th17细胞相关细胞因子；孟鲁司特；沙美特罗替卡松
[中图分类号] R562.2+5 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2016）11（c）-0027-04
[Abstract]Objective To observe effect of oral Montelukast combined with Salmeterol Fluticasone inhalation on experssion levels of cytokines related to T helper （Th） 17 cells transforming growth factor beta （TGF- beta），interleukin （IL）-17 and IL-23 in patients with new-onset bronchial asthma.Methods According to different treatment methods， sixty patient with new-onset bronchial asthma admitted into our hospital from October 2014 to April 2016 were divided into routine treatment group（n=20） and Montelukast combined with Salmeterol Fluticasone group whom received Montelukast combined with Salmeterol Fluticasone （n=40）.Another 20 health people were selected as healthy group.The serum and sputum supernatan levels of inflammatory factors such as TGF-β，IL-17 and IL-23 were measured by ELISA before and after outpatient treatment for 3 months.Results Compared with healthy group，the serum and sputum supernatan levels of inflammatory factors such as TGF-β，IL-17 and IL-23 was higher that in the routine treatment group and the Montelukast combined with Salmeterol Fluticasone group，and the difference was statistically significant （P<0.01）.After treatment for 3 months，the expression level TGF-β and IL-23 of two groups was significantly lower than that before treatment （P<0.05）；compared with routine treatment group，expression levels of serum TGF-β and IL-23 in the Montelukast combined with Salmeterol Fluticasone group decreased significantly （P<0.05）.There was no significant change in the expression of IL-17 in the serum and sputum supernatant of two groups before and after treatment for 3 months （P>0.05）.Conclusion Cytokines related cytokines Th17 cells may play important roles in the development of asthma，and using of Montelukast combined with Salmeterol Fluticasone can inhibit the experssion of cytokines related to Th17 in patients with asthma.
[Key words]Bronchial asthma；Cytokines related to Th17 cells；Montelukast；Salmeterol Fluticasone
支气管哮喘（简称哮喘）是由多种细胞（如嗜酸粒细胞、肥大细胞、T淋巴细胞、中性粒细胞、呼吸道上皮细胞等）和细胞组分参加的呼吸道缓慢炎症性和呼吸道高反响性为特征疾患，因医治缺少导致死亡率居高不下。据计算全世界现在大约有3亿哮喘患者，我国约有3000万哮喘患者并逐年添加。最新儿童哮喘世界共同指出，虽然现在运用激素、β受体激动剂等现有有用办法医治，全球仍有50%的儿童哮喘得不到操控[1]。曩昔一向用“Th1/Th2失衡学说”来解说哮喘的发病机制[2]，可是越来越多的根据标明，Th1/Th2平衡的调理并不单纯受Th1和Th2本身的影响。Th17细胞是近年来发现的一种新的CD4+辅助性T细胞亚群，其发生的细胞因子白细胞介素（IL）-17、转化生长因子-β（transforming growth factor-β，TGF-β）和IL-23在缓慢炎癥性疾病和本身免疫性疾病的发生开展中发挥了重要效果。本研讨进一步评论Th17细胞相关细胞因子在哮喘患者中的表达水平及孟鲁司特联合沙美特罗替卡松医治后的表达改动。
1材料与办法
1.1一般材料
选取2014年10月～2016年4月在我院呼吸科门诊和住院新近确诊的60例支气管哮喘患者为研讨目标。当选标准：①年纪18～65岁，无性别约束；②根据GINA（2009版）清晰确诊为支气管哮喘，且发病时刻<1年，FEV1%≥60%的轻中度继续哮喘患者；③未运用吸入性糖皮质激素医治；④知情赞同后参加研讨。扫除标准：凡有下列状况之一者，不作为当选病例。①既往有吸烟史；②肝功能、肾功能、心功能不全患者，或兼并其他脏器严峻疾病；③扫除其他肺部疾病（如COPD、支气管及肺部肿瘤）。其间男39例，女21例；年纪（47.91±4.32）岁。将60例患者依照不同的医治办法分为惯例医治组20例和孟鲁司特联合沙美特罗替卡松组40例，两组患者年纪、性别、病况等材料比较，差异无计算学含义（P>0.05），具有可比性。
一起归入20例我院健康体检人群作为健康对照组，其间男13例，女7例；年纪（45.23±3.77）岁，扫除标准：①患有缓慢肺部疾病、过敏性疾病人群；②具有哮喘宗族史者；③1个月内无急性上呼吸道感染和或肺部感染病史；④无糖皮质激素及免疫按捺剂运用史。
1.2办法
1.2.1给药办法 惯例医治组给予惯例对症支撑医治，即进行吸氧、吸痰、抗感染、静脉输液等归纳医治。口服孟鲁司特（鲁南贝特制药有限公司，国药准字H20083372）联合沙美特罗替卡松（Glaxo Operations UK Limited，批准文号：H20140165）组在惯例医治的根底上加用沙美特罗替卡松（舒利迭）每次50/250 μg，bid，联合口服孟鲁司特10 mg，qd，并进行为期3个月的随访。别离搜集医治前及标准医治3个月后两组患者诱导痰及外周血血清。
1.2.2诱导痰及血清的搜集 一切研讨目标均选用等渗盐水冲刷口腔，后吸入沙丁胺醇200 μg，3.0%高渗盐水10 ml超声雾化吸入进行痰诱导。在诱导过程中受试者如呈现严峻呼吸困难、咳嗽则随时中止。别离测定诱导前和诱导期间FEV1%。搜集痰标本后以4倍痰液体积的1%二硫苏糖醇对痰进行处理，2000 r/min离心10 min，搜集上清液保存于-20℃。搜集清晨空腹肘静脉血清，静置20 min后3000 r/min离心15 min，搜集血清保存于-20℃。
1.2.3 Th17细胞相关细胞因子TGF-β、IL-17和IL-23检测 运用北京美迪科生物技术有限公司供给的放射免疫试剂盒，选用酶联免疫吸附法测定诱导痰及空腹血清中TGF-β、IL-17和IL-23水平，详细操作过程按试剂盒说明书进行。
1.3计算学剖析
选用SPSS 17.0计算软件对数据进行剖析，计量材料用均数±标准差（x±s）标明，选用t查验，计数材料用百分率（%）标明，选用χ2查验，以P<0.05为差异有计算学含义。
2成果
2.1医治前后两组患者血清Th17细胞相关细胞因子表达水平的改动
医治前，两组哮喘患者血清TGF-β、IL-17和IL-23表达显着高于健康对照组，差异有计算学含义（P<0.01）。医治后3个月，两组患者血清TGF-β、IL-23表达较医治前显着下降，差异有计算学含义（P<0.05）；其间口服孟鲁司特联合沙美特罗替卡松组下降更显着，与惯例医治组比较差异有计算学含义（P<0.05）。两组医治后IL-17表达水平无显着改动（P>0.05）（表1）。
2.2医治前后患者诱导痰上清液中Th17细胞相关细胞因子表达水平的改动
口服孟鲁司特联合沙美特罗替卡松组医治前，新发哮喘患者痰培育上清中TGF-β、IL-17和IL-23表达显着高于健康对照组，差异有计算学含义（P<0.01）。医治后3个月，惯例医治组和孟鲁司特联合沙美特罗替卡松组患者痰培育上清液中TGF-β、IL-23表达较医治前显着下降，其间孟鲁司特联合沙美特罗氟替卡松组下降愈加显着，差异有计算学含义（P<0.05）；医治前后两组IL-17表达水平均无显着改动（P>0.05）（表2）。
3评论
哮喘是一种缓慢气道变应性疾病，CD4+T细胞的过度活化在哮喘的发病过程中起着要害的纽带效果。曩昔一向用“Th1/Th2失衡学说”来解说哮喘的发病机制[3]，可是越来越多的根据标明，Th1/Th2平衡的调理并不单纯受Th1和Th2本身的影响。在临床上，也没有满足的根据证明用Th1细胞因子能够有用地医治哮喘。相关文献报导即运用很多抗原特异性Th1细胞干涉并不能使Th2细胞诱导的气道高反响性得到操控[3-4]。Th17细胞是近来发现的不同于Thl和Th2的另一种CD4+T细胞亚群，其相关的细胞因子首要包含TGF-β、IL-17和IL-23。TGF-β可诱导CD4+初始T细胞向Th17细胞分解，然后促进炎症反响。研讨证明TGF-β缺少小鼠体内Th17细胞份额显着下降[5-7]；一起研讨发现TGF-β可直接促进气道间质细胞及上皮细胞中细胞外基质蛋白ECM表达，促进气道平滑肌中纤维蛋白堆积致气道壁增厚进而促进气道重构[8-9]。IL-17是由Th17细胞排泄的一种最首要炎症细胞因子，其参加哮喘发病首要经过募集气道嗜酸粒细胞集合滋润于气道部分，促进气道高反响性的发生[10-11]。IL-23在保持Th17细胞安稳以及诱导其增殖方面发挥要害效果。研讨显现IL-23缺少可削减气道部分嗜酸粒细胞滋润和Th2细胞因子的发生，然后改进气道炎症防备哮喘发生[12]。
本研讨经过调查新发支气管哮喘经孟鲁司特联合沙美特罗氟替卡吸入医治3个月后Th17相关细胞因子改动，进一步评论Th17细胞相关因子在哮喘发病过程中的效果及抗炎医治对其的影响。本研讨成果显现，与健康对照组比较，哮喘患者血清及痰培育上清中TGF-β、IL-17和IL-23表达显着升高，差异有计算学含义，这与蒋鲲等[13]的研讨成果共同。这提示Th17细胞及相关细胞因子排泄是参加哮喘发病的重要机制。经孟鲁司特联合沙美特罗替卡松医治后，患者血清和痰培育上清中TGF-β、IL-23表达较医治前显着下降，且显着低于惯例医治组，可见前期给予孟鲁司特联合沙美特罗替卡松医治对气道重塑干涉效果显着，这为临床前期孟鲁司特联合沙美特罗替卡松医治哮喘供给了进一步的试验根据。血清和痰培育上清液中IL-17表达水平在医治前后均无显着改动，这与笔者预期的研讨成果不共同，考虑IL-17在哮喘发病中效果復杂[14]。研讨报导IL-17在炎症发生开展过程中具有双向调理效果，IL-17在过敏性哮喘的树立过程中起正性调理效果[15-16]。在哮喘的致敏过程中IL-17又具有按捺炎症反响的效果，因而针对IL-17在哮喘发病中的详细效果机制，需要进一步更根底的试验研讨来证明。本研讨样本量较少，且调查时刻较短，并未进行长时间随访，因而关于Th17细胞相关因子对哮喘发病中的详细机制需要进一步研讨。
[参考文献]
[1]Cao Y，Sun Z，Liao L，et al.Human adipose tissue-derived stem cells differentiate into endothelial cells in vitro and improve postnatal neovascularization in vivo[J].Biochem Biophys Res Commun，2005，332（2）：370-379.
[2]Kim Y，Lee S，Kim YS，et al.Regulation of Th1/Th2 cells in asthma development： a mathematical model[J].Math Biosci Eng，2013，10（4）：1095-1133.
[3]Borish L，Aarons A，Rumbyrt J，et al.Interleukin-10 regulation in normal subjects and patients with asthma[J].J Allergy Clin Immunol，1996，97（6）：1288-1296.
[4]Dulek DE，Newcomb DC，Toki S，et al.STAT4 deficiency fails to induce lung Th2 or Th17 immunity following primary or secondary respiratory syncytial virus （RSV） challenge but enhances the lung RSV-specific CD8+ T cell immune response to secondary challenge[J].J Virol，2014，88（17）：9655-9672.
[5]Harrington LE，Hatton RD，Mangan PR.Interleukin 17-producing CD4+ effector T cells develop via a lineage distinct from the T helper type 1 and 2 lineages[J].Nat Immunol，2005，6（11）：1123-1132.
[6]Durrant DM，Metzger DW.IL-12 can alleviate Th17-mediated allergic lung inflammation through induction of pulmonary IL-10 expression[J].Mucosal Immunol，2010，3（3）：301-311.
[7]G？觟kmen MR，Dong R，Kanhere A，et al.Genome-wide regulatory analysis reveals that T-bet controls Th17 lineage differentiation through direct suppression of IRF4[J].J Immunol，2013，191（12）：5925-5932.
[8]Moir LM，Burgess JK，Black JL.Transforming growth factor beta 1 increases fibronectin deposition through integrin receptor alpha 5 beta 1 on human airway smooth muscle[J].J Allergy Clin Immunol，2008，121（4）：1034-1039.
[9]Secker GA，Shortt AJ，Sampson E，et al.TGF beta stimulated re-epithelialisation is regulated by CTGF and Ras/MEK/ERK signaling[J].Exp Cell Res，2008，314（1）：131-142.
[10]Wakashin H，Hirose K，Maezawa Y，et al.IL-23 and Th17 cells enhance Th2-cell-mediated eosinophilic airway inflammation in mice[J].Am J Respir Criti Care Medicine，2008，178（10）：1023-1032.
[11]Moraes-Vieira PM，Larocca RA，Bassi EJ，et al.Leptin deficiency impairs maturation of dendritic cells and enhances induction of regulatory T and Th17 cells[J].Eur J Immunol，2014，44（3）：794-806.
[12]Hackett TL，Warner SM，Stefanowicz D，et al.Induction of epithelial-mesenchymal transition in primary airway epithelial cells from patients with asthma by transforming growth factor-beta1[J].Am J Respir Crit Care Med，2009， 180（2）：122-133.
[13]蒋鲲，陈和斌，王莹，等.IL-17和TGF-β1在支气管哮喘患儿血清及支气管肺泡灌洗液中的改动及临床含义[J].我国当代儿科杂志，2013，15（8）：604-608.
[14]覃毅华.支气管哮喘急性发生期患者白细胞介素（IL-17）及超敏C反响蛋白的水平改动及临床含义[J].我国现代医师，2014，52（18）：23-25.
[15]Durrant DM，Gaffen SL，Riesenfeld EP，et al.Development of allergen-induced airway inflammation in the absence of T-bet regulation is dependent on IL-17[J].J Immunol，2009，183（8）：5293-5300.
[16]Lendermon EA，Dodd-o JM，Coon TA，et al.CD8（+）IL-17（+）T cells mediate neutrophilic airway obliteration in T-bet-deficient mouse lung allograft recipients[J].Am J Respir Cell Mol Biol，2015，52（5）：622-633.
（收稿日期：2016-10-17 本文編辑：方菊花）
