邹云峰 熊雅波 杨春林
[摘要] 意图 评论安排型激肽释放酶6（Klk6）、Her-2蛋白及Ki-67在子宫内膜癌中表达的含义。 办法 使用免疫組化检测正常增生期内膜、单纯性增生性内膜、复杂性不典型增生性内膜各19例和子宫内膜样腺癌38例中Klk6、Her-2蛋白、Ki-67的表达状况。使用计算学软件SPSS 17.0和Graphpad Prism 5进行计算学剖析检测并评论其含义。 成果 Klk6、Her-2蛋白、Ki-67在癌安排中表达高于其他病变（P<0.05），Klk6在不同肿瘤临床分期中表达有显着计算学差异（P<0.05）；而Klk6、Her-2蛋白在子宫内膜癌分级及淋巴结有无搬运表达无计算学差异（P>0.05）。 定论 Klk6、Her-2蛋白、Ki-67在子宫内膜癌中的表达与肿瘤发作有必定的相关性，特别是Klk6与子宫内膜癌分期相关，对临床确诊、医治及评价预后具有必定的价值。
[要害词] 子宫内膜癌；Klk6；Her-2蛋白；Ki-67；免疫安排化学
[中图分类号] R737.3 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2018）04-0025-04
[Abstract] Objective To investigate the significance of expression of tissue-specific kallikrein 6 （Klk6）， Her-2 protein and Ki-67 in endometrial carcinoma. Methods Immunohistochemistry was used to detect the expression of Klk6， Her-2 protein and Ki-67 in normal proliferative endometrium（n=19）， simple proliferative endometrium（n=19）， complex atypical hyperplastic endometrium （n=19） and endometrioid adenocarcinoma（n=38）. Statistical software SPSS 17.0 and Graphpad Prism 5 were used to detect and explore its significance. Results The expression of Klk6， Her-2 protein and Ki-67 in cancer tissues was higher than that in other lesions（P<0.05）. There was statistically significant difference in the Klk6 expression among different clinical stages（P<0.05）. There was no significant difference in the expression of Klk6 and Her-2 protein among different grades of endometrial carcinoma or in endometrial carcinoma with or without lymph node metastasis（P>0.05）. Conclusion The expression of Klk6， Her-2 protein and Ki-67 has some correlation with the occurrence of endometrial carcinoma， and has certain value for clinical diagnosis， treatment and prognosis evaluation， of which especially Klk6 is associated with staging of endometrial cancer.
[Key words] Endometrium carcinoma； Klk6； Her-2 protein； Ki-67； Immunohistochemistry
安排激肽释放酶基因宗族（kallikreins，Klks）是广泛存在于人体各安排中编码丝氨酸蛋白酶的一组同源基因。现已发现Klks基因宗族所编码的安排激肽释放酶共15种[1，2]，参加细胞到安排发作、开展的许多正常生理进程，如牙齿及神经、生殖系统的发育[3-5]等，此外，还与肿瘤的搬运有关。很多研讨标明Klks在许多肿瘤及非肿瘤疾病中有必定的表达差异，然后使用于临床确诊中，如Klk3即前列腺特异性抗原（PSA）已被广泛使用于前列腺腺癌的筛查，是确诊、预后、监测最重要的符号物之一[5，6]；也有研讨标明Klk6在卵巢癌的发作开展、滋润搬运等方面有必定效果[7]，但在子宫内膜相关病变中研讨较少。Her-2基因是某些肿瘤分子靶向医治检测基因之一，现临床对Her-2基因阳性的肿瘤分子靶向医治具有杰出的效果，如胃癌、乳腺癌等[8-11]。Ki-67是细胞增殖指数，对肿瘤预后的评价有必定效果。本试验经过检测正常增生期、良性增生及子宫内膜癌中的Klk6、Her-2蛋白的表达及Ki-67增殖指数，剖析与临床病理参数的相关性，以评论在子宫内膜癌发作开展中的效果，为子宫内膜癌的确诊、医治、预后供给参阅数据。
1 材料与办法
1.1 一般材料
搜集余姚市公民医院病理科2009年1月～2017年3月间存档材料，经病理清晰确诊女人患者病例：增生期子宫内膜19例（A组），年纪30～54岁，均匀（45.58±6.41）岁；单纯性增生19例（B组），年纪27～55岁，均匀（46.21±6.59）岁；复杂性不典型增生19例（C组），年纪28～63岁，均匀（50.50±9.68）岁；子宫内膜样腺癌38例（D组），年纪38～77岁，均匀（59.15±9.45）岁。各组间年纪比较，差异无计算学含义（P>0.05）。38例子宫内膜样腺癌中：1级10例（D1）、2级11例（D2）、3级17例（D3）；淋巴结搬运5例，无搬运33例；27例Ⅰ期、4例Ⅱ期、7例Ⅲ期（依照2009 FIGO手术分期进行分期）。
1.2 免疫组化
Klk6抗体来自美国R&D;公司，Her-2、Ki-67抗体和SP免疫组化试剂盒均來自福州迈新生物技术开发公司。安排选用10%中性福尔马林固定，白腊包埋，接连4 μm厚切片，选用链霉卵蛋白素染色（SP法）检测Klk6、Her-2、Ki-67蛋白。按SP免疫组化试剂盒（福州迈新生物技术开发公司）说明书进行根本过程：切片脱蜡→冲刷→PBS稀释的山羊血清关闭→冲刷→加生物素符号二抗工作液→PBS冲刷→滴加适量的碱性磷酸酶符号的链霉卵白素工作液→PBS冲刷→DAB液显色→苏木精复染→梯度酒精脱水枯燥→二甲苯通明→中性树胶封片→镜下调查。
1.3 成果断定
（1）Klk6蛋白染色成果断定规范：首要是子宫内膜腺上皮细胞质中呈棕色颗粒为阳性细胞，随机调查10个高倍镜视界（×400）并计数，每个视界至少计数100个细胞，取其均匀值为该病例的细胞阳性率。视界中无细胞阳性上色或阳性细胞<10%为阴性（0），阳性细胞在10%～50%为阳性（1+），阳性细胞>50%为强阳性（2+）。（2）Her-2蛋白定坐落细胞膜上，染色成果依据阳性信号强度及上色办法进行评价：无阳性细胞或膜阳性细胞<10%为阴性（0），>10%的细胞有弱小或难以发觉的膜上色或仅部分细胞膜上色为阳性（1+），>10%的细胞有弱或中等强度的完好“U”型膜上色为阳性（2+），>10%的细胞有中等或强的完好“U”型膜上色为阳性（3+）。Klk6及Her-2蛋白以免疫组化成果（1+）为阳性规范。（3）Ki-67定坐落细胞核，胞核染为棕黄色或棕褐色视为阳性表达，Ki-67增殖指数评判规范：挑选肿瘤细胞丰厚、阳性细胞较多的热门区域，挑选至少10个高倍镜视界，核算这些视界肿瘤细胞中阳性细胞的均匀值（%），作为Ki-67的增殖指数。
1.4 计算学办法
选用SPSS 17.0和Graphpad Prism 5软件进行计算学剖析，计数材料选用χ2查验，计量材料选用t查验，P<0.05为差异有计算学含义。
2 成果
2.1 Klk6蛋白在子宫内膜病变中的表达
Klk6蛋白在正常增生期子宫内膜，单纯性子宫内膜增生均不表达，阳性率分别为0（0/19）、0（0/19），复杂性不典型性增生阳性率100%（19/19），子宫内膜癌阳性率94.74%（36/38），Klk6蛋白在复杂性不典型性增生和子宫内膜癌中的表达水平显着高于良性子宫内膜病变（P<0.05）（表1，封三图4）。在子宫内膜癌1级、2级、3级中阳性表达无计算学差异（P>0.05）（表2）；在淋巴结搬运与无搬运之间表达无计算学差异（P>0.05）（表3）；但在不同临床分期中表达有显着计算学差异（P<0.05）（表4）。
2.2 Her-2蛋白在子宫内膜病变上的表达
Her-2蛋白在正常增生期子宫内膜阳性率为47.37%（1+，9/19），单纯性子宫内膜增生阳性率47.37%（1+，9/19），复杂性不典型性增生阳性率26.32%（1+，5/19），子宫内膜癌阳性率73.68%（1+，13/38；2+，12/38；3+，3/38），Her-2蛋白在子宫内膜癌中的表达水平显着高于增生期子宫内膜和其他内膜病变（P<0.05）（表5，封三图5）。在子宫内膜癌不同分级、有无搬运及不同临床分期间表达无计算学差异（P均>0.05）（表6～8）。
2.3 不同子宫内膜病变Ki-67增殖指数的表达剖析
Ki-67增殖指数在增生型内膜均匀阳性率56.84%，单纯性子宫内膜增生均匀阳性率33.42%，复杂性不典型性增生阳性率46.47%，子宫内膜癌阳性率55.68%，尽管Ki-67增殖指数在子宫内膜癌中表达高于单纯性增生（P<0.05）（封三图6，表9），但在子宫内膜癌不同安排学分级、是否搬运及不同临床分期中无显着计算学差异（表10～12）。
3 评论
子宫内膜癌是女人生殖系统常见恶性肿瘤之一。近年来子宫内膜癌的发作率有上升趋势[12]，多发作于绝经后妇女，发病顶峰在50～70岁。其发病率增高原因有多种，如人类寿数的延伸使高龄妇女增多，然后内膜癌高发年纪人群基数增大；杰出养分使雌激素水平相对增高；此外，初潮年纪过早、绝经后延、未产、肥壮、高血压、糖尿病等都可以影响子宫内膜癌的发作。经过很多研讨标明，雌激素水平的升高及子宫内膜长期承受雌激素的影响是引起子宫内膜癌发作的要害。
Klk6蛋白受类固醇激素调控，在乳腺癌、卵巢癌、睾丸癌和前列腺腺癌等激素相关的恶性肿瘤中反常表达[3-5]，有研讨标明Klk6可引起宫颈癌细胞增殖及搬运[13]。本研讨发现Klk6在子宫内膜癌中阳性表达显着高于正常增生期子宫内膜和其他子宫内膜病变（P<0.05），在子宫内膜癌1级、2级、3级中阳性表达无计算学差异（P>0.05）；但在不同临床分期中表达有显着计算学差异（P<0.05）。提示Klk6在子宫内膜癌的发作开展中起到必定的效果，与临床分期有必定的相关性。与佟丽波等[14，15]研讨Klk6及Klk7在子宫内膜癌中的含义相一致。
Her-2基因是某些肿瘤分子靶向医治检测基因之一，如胃癌、乳腺癌等[8，16，17]，本试验发现Her-2蛋白在子宫内膜癌中的表达水平显着高于正常增生期子宫内膜和其他子宫内膜病变（P<0.05）。但在子宫内膜癌不同分级及淋巴结有无搬运间无计算学差异（P>0.05），提示Her-2基因在子宫内膜癌发作的前期起到必定效果。
Ki-67可检测癌细胞增殖指数，表明癌细胞增殖活性，对内膜癌的确诊与预后的评价起到必定的效果[18，19]。本试验显现Ki-67增殖指数在子宫内膜癌中表达高于单纯性增生，具有计算学差异（P<0.05），而在其他子宫内膜病变无显着差异。
Klks宗族首要是编码丝氨酸蛋白酶[3]，即一种重要的蛋白水解酶，其间Klk6效果是降解细胞外基质中纤维蛋白，加强肿瘤细胞搬运的可能[20]。Her-2是表皮生长因子受体宗族成员之一，首要是经过与EGF结合然后促进细胞增殖及搬运[21]。咱们想象Klk6和Her-2一起表达是否加强肿瘤搬运的可能性，两层判别预后，但由于本试验样本数较少，暂时未做相关计算，有待后续进一步研讨。
综上所述，本研讨提示Klk6、Her-2、Ki-67对子宫内膜癌的发作开展起到必定的效果。而且Klk6与临床分期有必定的相关性，且提示Klk6有可能成为临床前期筛查子宫内膜癌重要标志物，可能成为肿瘤医治的有用靶点。
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（收稿日期：2017-11-01）
