林智平++++++段炤
[摘要]意图 调查GLI1表达与胃癌上皮间质变换的联系。办法 搜集2006年1月～2011年12月确诊清晰、材料完整的58例手术切除胃癌标本，做成安排芯片，选用免疫组化SP的办法检测安排芯片中胃癌安排及正常胃黏膜安排中GLI1、E-cadherin、N-cadherin的表达。成果 GLI1在胃癌中表達较正常安排高，与胃癌的淋巴搬运、临床分期、Lauren分型、肿瘤分解显着有关，差异有统计学含义（P<0.05）；E-cadherin在正常胃黏膜安排表达比胃癌安排高，与胃癌的淋巴搬运、临床分期、Lauren分型、肿瘤分解显着有关，差异有统计学含义（P<0.05）；N-cadherin在胃癌中表达高于正常胃黏膜安排，与胃癌的淋巴搬运、临床分期、Lauren分型、肿瘤分解显着有关，差异有统计学含义（P<0.05）；GLI1表达与上皮间质变换的状况有关，差异有统计学含义（P<0.01）。定论 在胃癌安排中GLI1表达与E-cadherin、N-cadherin有关，提示GLI1可能参加了EMT进程。
[要害词]胃癌；GLI1；上皮间质变换
[中图分类号] R735.2 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2017）10（b）-0049-04
[Abstract]Objective To observe the relationship between GLI1 expression and epithelial-mesenchymal transition in gastric cancer.Methods 58 cases of gastric cancer specimens who were given surgical resection with clear diagnosis and complete data from January 2006 to December 2011 were collected，and tissue microarray was made.The expression of GLI1，E-cadherin and N-cadherin in gastric carcinoma and normal gastric mucosa in tissue microarray were detected by immunohistochemical SP method.Results GLI1 expression in gastric cancer was higher than that in normal tissues （P<0.05），which was significantly associated with lymph node metastasis，clinical staging，Lauren typing and tumor differentiation of gastric cancer，with significant difference （P<0.05）.The expression of E-cadherin in normal gastric mucosa was higher than that in gastric cancer （P<0.05），which was significantly associated with lymph node metastasis，clinical staging，Lauren typing and tumor differentiation of gastric cancer，with significant difference （P<0.05）.The expression of N-cadherin in gastric cancer was higher than that in normal gastric mucosa （P<0.05），which was significantly associated with lymph node metastasis，clinical staging，Lauren typing and tumor differentiation of gastric cancer，with significant difference （P<0.05）.GLI1 expression was associated with epithelial-mesenchymal transition，with significant difference （P<0.01）.Conclusion The expression of GLI1 in gastric cancer is associated with E-cadherin and N-cadherin，indicating that GLI1 may be involved in the EMT process.
[Key words]Gastric cancer；GLI1；Epithelia-mesenchymal transition
胃癌（gastric cancer）是最常见的恶性肿瘤之一，发病率在全球常见癌症中居第4位，在癌症相关死因中居第2位，每年因胃癌逝世者约70万例[1]；其在我国常见癌症中居第2位，在癌症死因中居第3位[2]。我国中晚期胃癌患者术后5年的生计率为20%～30%，前期胃癌患者的生计率最高为85%～100%[3-4]。决议患者生计率的首要因素是搬运，因而寻觅肿瘤搬运的标志物是临床研讨的方向。研讨发现上皮间质变换（epithelia-mesenchymal transition，EMT）现象及SHH信号通路中的GLI1表达与肿瘤的搬运密切相关。EMT是一种根本的生理病理现象，其表达上调的因子首要是N-cadherin，表达下调的因子首要是E-cadherin。本研讨以胃癌标本作为研讨目标，选用免疫组化检测胃癌中SHH信号通路中核转录因子GLI1及E-cadherin、N-cadherin的表达状况，现报导如下。endprint
1目标与办法
1.1研讨目标
搜集我院病理科存档，2006年1月～2011年12月确诊清晰、材料完整的58例手术切除胃癌标本，一切患者术前未经放疗及抗癌化学药物医治，其间男性38例，女人20例；依照WHO胃癌安排分类及分级规范概括，分解类型：低分解24例，中高分解34例；按TNM进行分期，其间Ⅰ+Ⅱ期有31例，Ⅲ+Ⅳ期有27例；按Lauren進行分型，其间肠型30例，弥漫型28；淋巴结搬运组39例，无搬运组21例。一起选取15例正常胃黏膜用作对照。本研讨现已医院医学道德委员会同意。
1.2试剂
GLI1抗体购自深圳华拓公司，E-cadherin抗体、N-cadherin抗体、SABC（兔IgG）-POD试剂盒、SABC（小鼠IgG）-POD kit、DAB显色试剂盒（黄）购自武汉博士德公司。
1.3免疫组化染色
一切标本经100%甲醛固定，白腊包埋，制造成安排芯片，HE染色，SP法免疫组化。
1.4成果断定
①GLI1阳性的表达：定坐落细胞胞浆及胞核内，肿瘤细胞胞质内和（或）胞核上呈现棕黄色颗粒为阳性细胞。核算染色细胞所占百分数。染色细胞≥20%为阳性，<20%为阴性[5]。②E-cadherin：蛋白的阳性表达呈棕褐色，首要定坐落细胞膜，或环绕细胞膜呈线形。成果判别参照Sulzers分级法，阳性细胞<10%为阴性；≥10%为阳性[6]。③N-cadherin：以细胞膜和细胞质中棕黄色为阳性细胞数，按阳性细胞所占份额进行分级，<10%为阴性，≥10%为阳性[7]。
1.5统计学办法
选用SPSS 13.0统计学软件对数据进行剖析，计量材料以均数±规范差（x±s）表明，选用t查验，计数材料选用χ2查验，以P<0.05为差异有统计学含义。
2成果
2.1 GLI1在胃癌安排中的表达及与病理参数的联系剖析
GLI1在正常胃黏膜安排中的表达率为20%，在胃癌安排中的表达率为83%，两组比较差异有统计学含义（P<0.05）。GLI1阳性表达率与胃癌的淋巴搬运、临床分期、Lauren分型、肿瘤分解显着相关，差异有统计学含义（P<0.05）。两组的性别、年纪、肿瘤巨细相比较，差异无统计学含义（P>0.05）（表1）。
2.2 E-cadherin在胃癌安排中的表达及与病理参数的联系剖析
E-cadherin在正常胃黏膜中的表达率为80%，在胃癌安排中的表达率为36%，两组比较差异有统计学含义（P<0.05）。E-cadherin阳性表达率与胃癌的淋巴搬运、临床分期、Lauren分型、肿瘤分解显着相关，差异有统计学含义（P<0.05）。两组的性别、年纪、肿瘤巨细比较，差异无统计学含义（P>0.05）（表2）。
2.3 N-cadherin在胃癌安排中的表达及与病理参数的联系
N-cadherin在正常胃黏膜中的表达率为11%，在胃癌安排中的表达率为43%，两者比较差异有统计学含义（P<0.05）。N-cadherin阳性表达率与胃癌的淋巴搬运、临床分期、Lauren分型、肿瘤分解显着相关，差异有统计学含义（P<0.05）。两组的性别、年纪、肿瘤巨细比较，差异无统计学含义（P>0.05）（表3）。
2.4胃癌安排中GLI1表达EMT状况的联系
参阅David Sarrio的办法，挑选E-cadherin表达阴性一起N-cadherin表达阳性的病例作为发作EMT进程，记为EMT（+）。在58例胃癌中，EMT阳性表达率为45%，运用Kendall tau-b相关剖析显现，GLI1与EMT的状况有必定联系，差异有统计学含义（P<0.05）（表4）。
3评论
EMT的概念最早于1982年，由Greenburg和Hay[8]在研讨中提出。其是一种杂乱的病理生理现象，在多种病理生理进程（如损害、修正、炎症、肿瘤侵袭搬运等）开展中发挥了重要含义。在正常状况下，EMT的发作是遭到机体调控的，然而在肿瘤中，因丧失了机体正常调控效果，肿瘤细胞经过EMT方式取得侵袭才能并向远处搬运。Thiery[9]选用EMT现象来描绘癌的发作及开展，详细为：正常上皮细胞沿着基底膜成长，经过表现遗传学改动或基因的改动，细胞发作转化生成原位癌；继续开展，癌细胞经过EMT构成部分分散，基底膜变脆，细胞侵入淋巴管及血管，发作搬运，构成搬运癌。EMT是许多肿瘤侵袭和搬运的一个重要的进程[10]。在各类细胞中，EMT现象与肿瘤的侵袭搬运密切相关，在卵巢癌、乳腺癌、结肠癌、肺癌、前列腺癌、口腔癌、肝癌等多种癌症的原位滋润和远处搬运中发挥了重要效果[11]。余韬等[12]发现EMT在肿瘤发作、肿瘤演进中也发挥了要害的效果。本研讨成果显现，E-cadherin、N-cadherin表达水平与胃癌的淋巴搬运、临床分期、Lauren分型、肿瘤分解显着相关，提示胃癌发作与E-cadherin表达下调及N-cadherin上调有关，E-cadherin、N-cadherin对保持细胞间衔接和极性起着重要效果，影响肿瘤细胞的生计与增殖，也提示E-cadherin、N-cadherin是EMT途径的重要标志。
Hedgehog信号通路与肿瘤的发作、开展、侵袭及搬运密切相关[13-14]。Hedgehog信号通路之一的SHH信号通路表现出继续性激活并调控下流基因转录，经过诱导细胞增殖、阻断细胞凋亡、促进血管构成，参加肿瘤的构成。SHH通路较为杂乱，首要由排泄型信号糖蛋白SHH、跨膜蛋白受体PTCH和另一跨膜蛋白SMO以及转入因子蛋白GLI1及下流靶基因组成[15-17]。PTCH结合SHH蛋白，解除了对SMO的按捺，按捺GLI1的水解。GLI1是整个信号通路中最要害的信号分子，功用性激活均会使该信号通路继续激活，全长的GLI1蛋白进入细胞核后激活意图基因的转录，致使细胞过度增殖，终究导致肿瘤的发作和开展[18]。生物化学研讨显现，GLI1因缺少磷酸化和剪切润饰所有必要的蛋白激酶A辨认位点，因而仅有激活子功用，直接调控着该通路靶基因的转录。依据以往的文献，以GLI1的核染色作为这一信号通路活化的标志，以GLl1阳性细胞百分比添加作为判别这一信号通路活化程度进步的目标[19]。倪卓著等[20]发现，反常激活的Hedgehog通路中GLI1可能参加了调控Snail、Ecadherin的表达，经过调控EMT的发作，促进肝癌的发作、开展。Yanai等[21]发现，GLI1蛋白表达与表现胃癌侵袭力的三项目标（滋润深度、淋巴结搬运、TNM分期）密切相关，侵袭力强的胃癌安排中的GLI1蛋白表达增强，并且在胃癌搬运淋巴结中GLI1显着激活，暗示着SHH通路活化的胃癌可能具有较高的搬运潜能。本研讨成果显现，GLI1阳性表达与胃癌的淋巴搬运、临床分期、Lauren分型、肿瘤分解显着有关，有淋巴结搬运、临床Ⅲ+Ⅳ期、弥漫型、低分解的患者其GLI1阳性率显着增高，提示GLI1可作为胃癌的一个有用调查标志，有助于病况的判别。GLI1在胃癌安排细胞中的表达高于正常胃黏膜的表达，两者的差异有统计学含义。GLI1有可能作为一种调控胃癌侵袭和搬运的要害步骤，从而对胃癌的发作及搬运起相关性效果。endprint
在本研讨中，GLI1和N-cadherin在胃癌中表达较正常安排高，E-cadherin在正常胃黏膜安排表达比胃癌安排高。GLI1表达与EMT的状况有关。跟着研讨的开展，胃癌中Hedgehog通路调理EMT进程的机制益发清楚，靶向干与或阻断Hedgehog通路，将为胃癌的临床医治供给一个更为宽广的使用远景。
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