张玉昆
[摘要] 意图 评论肺纤维化小鼠肺安排中基质金属蛋白酶-9（MMP-9）和转化生长因子-β1（TGF-β1）的表达及含义。 办法 将60例C57BL/6小鼠随机均分为试验组、医治组和对照组，其间试验组和医治组选用博莱霉素诱导树立肺纤维化小鼠模型，其他20例健康小鼠作为对照组，选用免疫组化SP法测定试验组和对照组肺安排中MMP-9和TGF-β1蛋白的表达状况。并选用格列卫对医治组进行干涉，对医治前后肺安排中MMP-9和TGF-β1的表达状况进行比较。 成果 对免疫组化测得的光密度值进行比较，试验组MMP-9和TGF-β1的值显着高于对照组，差异有统计学含义（P < 0.05）。将医治组中进行干涉的20只小鼠进行MMP-9和TGF-β1的光密度值测定，干涉前后进行比较，差异有统计学含义（P < 0.05）。 定论 肺纤维化小鼠肺安排中MMP-9和TGF-β1呈高表达，格列卫对博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化程度可能有按捺效果。
[关键词] 肺纤维化小鼠；MMP-9；TGF-β1；格列卫
[中图分类号] R563.9 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2014）04-0014-03
肺纤维化是间质性肺疾病病理特征之一，间质性肺疾病病变前期以充满性肺泡炎为主，这以后逐渐呈现肺间质纤维化。特发性肺纤维化是其间最常见的一个类型，该病发病机制不明，临床预后很差，中位生存期仅2.8年，现在无特效的医治办法[1]。因而，深入研讨肺纤维化的发病机制并探究有用的医治途径是现在研讨的热门和要点[2]。本研讨经过树立肺纤维化小鼠动物模型评论肺安排中MMP-9和TGF-β1蛋白表达及含义，现报导如下。
1 材料与办法
1.1 试验动物
选取由广州医科大学SPF动物试验中心供给的健康雌性C57BL/6小鼠60只作为研讨目标，均为周龄4～6周、体重16～18 g的健康清洁级小鼠。将上述小鼠置于室温18℃～22℃，湿度60%～70%，通风杰出的同一清洁养殖室内进行养殖。
1.2 试验办法
动物模型的树立[3，4]：将60只小鼠随机分为3组：试验组（n=20）、医治组（n=20）和对照组（n=20）。小鼠固定于手术台，选用水合氯醛进行麻醉，经腹腔依照（300～400）mg/kg剂量注入，取颈部切断长约1.5 cm，逐切开暴露气管，经气管软骨环空隙进行6号细针穿刺，试验组依照5 mg/kg推注博莱霉素生理盐水溶液，对照组推注等量无菌生理盐水溶液，逐层缝合切断后，重复翻转小鼠2 min，坚持药液布满双肺。小鼠清醒后惯例进行养殖。造模1周后，将试验组中20只小鼠及对照组的20只别离处死取肺安排。具体进程：选用氯胺酮腹腔麻醉，惯例消毒铺巾，沿胸骨中线翻开胸腔，除掉结缔安排和脂肪安排、气管支气管及其他非肺安排成分，取肺后，惯例给予10%中性福尔马林固定，白腊包埋，切片后拟行免疫组化检测。医治组中20只小鼠则每天依照50 mg/（kg·d）给予格列卫腹腔内打针进行干涉。干涉1周后，同法取小鼠肺安排标本进行检测。选用免疫组化SP法，严厉依照阐明书中的操作进程进行操作。选用美国IPP6.0专业图画剖析软件对MMP-9和TGF-β1免疫组化成果中的光密度值进行测定。
1.3 统计学办法
使用SPSS 18.0统计学软件进行数据剖析，计量材料用均数±标准差（x±s）标明，两样本均数的比较选用t查验，P < 0.05为差异有统计学含义。
2 成果
2.1 试验组与对照组肺安排中MMP-9和TGF-β1表达状况的比较
试验组与对照组由免疫组化测得的光密度值进行比较，MMP-9和TGF-β1的值显着高于对照组，差异有统计学含义（P < 0.05）。见表1。
2.2 医治组干涉前后肺安排中MMP-9和TGF-β1表达状况的比较
将医治组中进行干涉的20只小鼠进行MMP-9和TGF-β1的光密度值测定，干涉前后进行比较，差异有统计学含义（P < 0.05）。见表2。
3 评论
间质性肺疾病是一组肺充满性疾病，包含有200多个病种，其发病原因可能与遗传、免疫损害、病菌感染、职业性的粉尘接触及放射医治等要素有关。现在，有多种学说，包含Th1/Th2因子失衡学说、肺泡炎性学说、脂质过氧化学说、细胞凋亡学说。现在遍及以为，细胞因子网络失衡在肺纤维化的进程中发挥了重要效果，多种要素参加了肺纤维化的构成[5，6]。
研讨标明，TGF-β1在肺纤维化的发作开展中发挥着关键效果。TGF-β1首要来源于单核巨噬细胞，与成纤维细胞外表受体结合，促进成纤维细胞的割裂、增殖，参加结缔安排生成。动物试验标明，TGF-β1经过介导肺泡炎症及损害，促进肺成纤维细胞发生氨基多糖和胶原，诱导成纤维细胞分化为肌成纤维细胞，终究促进肺纤维化的构成[7，8]。研讨还显现，MMP在肺间质中广泛存在，人体肺间质胶原组成与降解代谢坚持一种动态平衡，当肺安排中MMP表达及活性增高时，肺安排中正常胶原蛋白被纤维性间质替代，终究导致肺纤维化的构成[9]。
研讨标明，格列卫（甲磺酸伊马替尼）是一种小分子酪氨酸蛋白激酶按捺物，首要医治缓慢粒细胞白血病（CML）、胃肠道间质瘤，格列卫的抗纤维化效果是在医治CML的进程中逐渐被注意到的。这以后相关的临床及基础研讨证明格列卫对多种安排器官具有抗纤维化的效果。现在遍及的观念以为格列卫经过阻断细胞外基质组成按捺纤维化的效果[10]。
本研讨经过树立肺纤维化小鼠动物模型，证明试验组小鼠的肺安排中MMP-9和TGF-β1蛋白的表达显着升高，提示MMP-9和TGF-β1蛋白的反常表达与肺纤维化联系密切，与相关研讨成果共同[10]。本研讨尝试用格列卫干涉博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化，成果显现，试验组小鼠经格列卫干涉后，肺安排中MMP-9和TGF-β1蛋白的表达干涉前后明显下降，提示格列卫可能经过按捺MMP-9和TGF-β1蛋白的表达进而削减肌成纤维细胞的数量，但格列卫对肺纤维化按捺效果还有待于进一步研讨[11]。
综上所述，肺纤维化小鼠肺安排中MMP-9和TGF-β1蛋白呈高表达，格列卫对博莱霉素诱导的小鼠纤维化程度可能有按捺效果，为肺纤维化的医治供给新的医治思路，有关的机制及效果还有待进一步的深入研讨。
[参考文献]
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[9] 魏路清，董彦，李振华，等. 阿托伐他汀对肺纤维化大鼠肺泡灌洗液MMP-9和TIMP-1的影响[J]. 浙江大学学报（医学版），2011，40（1）：64-70.
[10] 李莉，李燕芹. 格列卫对肺纤维化小鼠的干涉机制[J]. 我国呼吸与危重监护杂志，2009，8（4）：365-370.
[11] Wu J，Ling C，He H，et al. Effect of compound panax notoginsenoside granules on TGF-beta1/smads signaling pathway in rats with bleomycin-induced pulmonary fibrosis[J]. Xi Bao Yu Fen Zi Mian Yi Xue Za Zhi，2013，29（9）：927-930.
（收稿日期：2013-11-14）
综上所述，肺纤维化小鼠肺安排中MMP-9和TGF-β1蛋白呈高表达，格列卫对博莱霉素诱导的小鼠纤维化程度可能有按捺效果，为肺纤维化的医治供给新的医治思路，有关的机制及效果还有待进一步的深入研讨。
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（收稿日期：2013-11-14）
综上所述，肺纤维化小鼠肺安排中MMP-9和TGF-β1蛋白呈高表达，格列卫对博莱霉素诱导的小鼠纤维化程度可能有按捺效果，为肺纤维化的医治供给新的医治思路，有关的机制及效果还有待进一步的深入研讨。
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（收稿日期：2013-11-14）
