苏连明 庄彦华 颜彬
[摘要] 意图 研讨幽门螺杆菌（Hp）感染与胃癌安排中p27基因表达的相关性，评论Hp感染引起胃癌发病的可能机制。办法 Hp 感染检测选用 14碳-尿素酶呼吸试验（14C-UBT）法，使用免疫安排化学染色方便法检测p27蛋白的表达及与胃癌临床病理目标的联系，比较Hp感染与p27蛋白表达的相关性。 成果 胃癌患者Hp感染率为67.9%；p27蛋白在胃癌安排中的表达率与患者的性别、年纪和肿瘤巨细无相关性（P>0.05），而与胃癌安排分解程度、滋润深度、淋巴结搬运和TNM分期密切相关；Hp感染与胃癌中p27基因表达呈负相关（r=-0.486，P<0.05）。定论 Hp感染可能经过下降胃黏膜抑癌基因 p27蛋白表达水平引起胃黏膜癌变。
[关键词] Hp感染；胃癌；p27蛋白
[中图分类号] R735.2 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2014）23-0019-03
[Abstract] Objective To study the relationship between Helicobacter pylori（Hp） infection and expression of p27 gene in gastric carcinoma tissue， to explore the possible mechanism of Hp infection induced gastric cancer. Methods Hp infection was detected by14 carbonandurease breath test（14C-UBT） method，immunohisto Chemical staining was used to detect the expression of p27 protein and quick method， and the relationship with the clinicopathological parameters of gastric cancer， correlation between Hp infection and the expression of p27 protein. Results Astric cancer patients with Hp infection rate was 67.9%； There was no correlation between the expression rate of p27 protein in gastric carcinoma patients and thegender， age and tumor size （P>0.05）， and the degree of differentiation and gastric carcinoma， invasion depth， lymph node metastasis and was closely related to the TNM staging； Is negatively related to p27 gene expression in HPinfection and gastric cancer （r=-0.486， P<0.05）. Conclusion HP infection may be by reducing gastric mucosal expression of tumor suppressor gene p27 protein level sinduced gastric mucosal carcinogenesis.
[Key words] Hp infection； Gastric carcinoma； p27 protein
胃癌约占胃恶性肿瘤95%以上，在每年新增的癌症病例数中占第4位，其发作进程是一个多进程、多要素进行性开展的进程[1，2]，在正常状况下胃黏膜上皮细胞的增值和凋亡之间坚持动态平衡，这种平衡的保持有赖于癌基因，抑癌基因及一些成长因子的一起调控[3，4]。p27作为细胞周期的负性调控因子，能广泛按捺多种细胞周期蛋白和激酶的活性，被以为是一种抑癌基因[5]。1994年WHO宣告Hp是人类胃癌的Ⅰ类致癌原[6]，但Hp引起胃癌的机制没有十分明确，本文研讨胃癌安排中Hp感染与抑癌基因p27的表达及相关性，进一步评论Hp感染引起胃癌发病的可能机制。
1 材料与办法
1.1胃癌安排标本
56例胃癌标正本均来自2012年12月～2013年12月牡丹江医学院红旗医院普外科手术切除标本，其中男30例，女26例；年纪32～72 岁，均匀 54岁；胃癌安排分解程度：中-高分解腺癌31例，低分解腺癌 25 例，一切患者术前均未承受化疗，且有完好的临床材料。
1.2 试剂
碳14-尿素酶呼吸试验仪购自北京华恒安邦科技有限公司，鼠抗人p27单克隆抗体、方便法通用型二抗、氨基联苯胺（DAB）显色试剂盒均购自福州迈重生物技术开发公司。
1.3 办法
1.3.1 Hp检测 一切试验病例行胃镜查看时疑为胃癌取病理者，胃镜术后均行碳14呼气试验检测。
1.3.2 p27蛋白表达检测 选用免疫组化方便法，按试剂盒阐明书由病理科专人担任逐项进行（福洲迈重生物技术开发有限公司）。
1.3.3 成果断定 免疫组化染色评分，依据以下3个方面断定[7] ①染色密度评分：0，无染色；1，弱染色；2，中染色；3，强染色；②阳性细胞百分比评分：0，0%；1，<10%；2，10%～50%；3，51%～90%；4，>90%；③染色方法评分：0，无染色；1，散在染色；2，局灶染色；3，充满染色。每例标本染色积分=①×②×③。阴性为0分，阳性为1～36分。endprint
1.4 计算学处理
试验数据选用χ2查验，相关剖析选用Spearman等级相关剖析，以相联系数-1 2 成果 2.1 Hp检测成果 56例胃癌患者均行14C-UBT检测，仪器见封三图1。成果显现，Hp感染38例，感染率为67.9%。 2.2 p27蛋白表达与胃癌临床病理特征的联系 p27蛋白在胃癌安排中主要以细胞浆和（或）细胞核呈现棕黄色染色为主同，见封三图2。其表达率与患者的性别、年纪和肿瘤巨细无相关性（P>0.05），而与胃癌安排分解程度、滋润深度、淋巴结搬运和TNM分期密切相关（P<0.05），见表 1。 2.3 Hp感染与p27蛋白表达的相关性研讨 计算学剖析标明，Hp感染与胃癌安排中p27蛋白表达的相关性研讨呈负相关（r=-0.486，P<0.05），见表2。 3 评论 Hp感染是胃癌发作开展的Ⅰ类致病原，Hp具有黏附性，排泄的毒素有致病性，导致胃黏膜病变，Hp仍是一种硝酸盐还原剂，具有催化亚硝化效果而引起致癌效果，发作癌变的次序为：缓慢炎症——萎缩性胃炎——萎缩性胃炎伴肠化——异型增生——癌变[8]，但Hp感染引起胃癌发作并非单一机制所造成的，与人体内癌基因的激活和骤变及抑癌基因的失活有关，与胃癌发作相关的癌基因包括ras基因、c-myc和Bcl-2活化[9]，抑癌基因包括野生型P53、APC、DCC、p27等。p27是近些年发现的新的CKI基因[10] （细胞周期蛋白依赖性激酶按捺剂，cyclin-dependent kinase inhibitors）， p27包括两个有编码功用的外显子和一个无功用的外显子及一个内含子，定坐落人体12p13交界处，研讨发现[11]，p27蛋白具有多种生物学功用，可直接按捺Cyclin-CDK（细胞周期素-细胞周期蛋白依赖性激酶）复合物的生物学活性然后阻挠细胞经过G1/S期变换的“关卡”[12]，一起还可以作为细胞外影响信号的潜在前言来调控细胞周期[13]，p27作为细胞周期的负性调控因子，被以为是一种抑癌基因，具有按捺肿瘤的发作、开展的效果。在对乳腺癌、肺癌、和内排泄肿瘤的研讨中发现p27蛋白表达与肿瘤的成长、分解、搬运及预后等密切相关[14]。本试验成果显现：Hp阳性表达率呈递减时，而p27蛋白表达呈升高趋势，计算学剖析标明，Hp感染与胃癌安排中p27蛋白表达呈负相关，这一成果阐明，Hp 感染可引起胃黏膜抑癌基因 p27 表达下降或缺失，然后导致胃黏膜癌变的发作，其机制可能为，Hp感染可能使p27在胃癌的开展进程中逐步丧失了作为细胞周期负调控因子的抑癌效果，导致胃癌发作，一起p27下降可引起细胞外基质和细胞黏附性下降[15]，然后导致肿瘤滋润、搬运。这也可能是Hp感染引起胃癌发作的机制之一。 [参考文献] [1] 邹小农，孙喜斌，陈万青，等. 2003～2007 年我国胃癌发病与逝世状况剖析[J]. 肿瘤，2012，32（2）：109-114. [2] 陈清波，王洪波，徐明垚，等. 缓慢胃病伴肠上皮化生、胃癌与幽门螺旋杆菌感染的联系[J]. 有用癌症杂志，2010， 25（2） ： 169-171. [3] 杜中红，魏晓萍，惠来源，等. 胃癌前病变癌变机制及筛查研讨开展[J].现代肿瘤医学，2010，18（4）：814-816. [4] 陆再英，钟南山. 内科学[M]. 第7版.北京：公民卫生出版社，2008：396. [5] Coqueret O. New roles for p21 and p27 cell cycle inhibition：A fuction for each cell compartment[J]. Trenda Cell Bid， 2003，13（2）： 65-70. [6] 王建馗，冯义朝. 幽门螺杆菌感染与胃癌部分滋润的相关性[J]. 世界华人消化杂志，2010，18（3） ： 268-271. [7] 苏连明，艾 江，孔祥红. 结直肠癌PTEN基因表达及与P-ERK相关性研讨，我国安排化学与细胞化学杂志[J].2012，21（3）：300-303. [8] 赵红燕，张凤荣，单恩忠. 萎缩性胃炎 Hp 感染阳性率和Ki -67增殖的相关性研讨[J]. 我国医疗前沿，2010，5（8） ： 1-2. [9] Yu XW，Xu Y，Gong YH，et al. Helicobacter pylori induces malignant transformation of gastric epithelial cells in vitro[J]. APMIS，2011，119（3）：187-197. [10] 张广建，寇有为，王强. 胃癌安排中p27表达与cyclinD1，cyclinE表达的相关性[J]. 世界华人消化杂志，2007，15（36）：3809-3814. [11] Wei Z，Jiang X，Qiao H，et al. STAT3 interacts with Skp2/p27/p21 pathway to regulate the motility and invasion of gastric cancer cells[J]. Cell Signal，2013，25（4）：931-938. [12] 李胜水，许华，杨晶. p27和ILK在胃癌及癌前病变中的表达及含义[J]. 现代肿瘤医学，2010，18（1）：128-130. [13] Sgambato A，Migaldi M，Leocata P，et al. Loss of p27kip1 expresssion is a strong independent prognostic factor of reduced survival inno gastric carcinomas[J]. Cancer，2008， 89（11） ： 224-227. [14] Lee SR，Shin HO. Detemining the effect of transforming growth factor-B1 on odk4 and p27 in gastric cancer and cholangiocarcinoma[J]. Oncol Lett，2013，5（2）：694-698. [15] 王立辉，杨静玉，崔巍，等. 幽门螺杆菌感染与胃癌中p21和p27表达的联系[J]. 微生物学杂志，2008，28（2）： 40-43. （收稿日期：2014-03-13）
1.4 计算学处理
试验数据选用χ2查验，相关剖析选用Spearman等级相关剖析，以相联系数-1 2 成果 2.1 Hp检测成果 56例胃癌患者均行14C-UBT检测，仪器见封三图1。成果显现，Hp感染38例，感染率为67.9%。 2.2 p27蛋白表达与胃癌临床病理特征的联系 p27蛋白在胃癌安排中主要以细胞浆和（或）细胞核呈现棕黄色染色为主同，见封三图2。其表达率与患者的性别、年纪和肿瘤巨细无相关性（P>0.05），而与胃癌安排分解程度、滋润深度、淋巴结搬运和TNM分期密切相关（P<0.05），见表 1。 2.3 Hp感染与p27蛋白表达的相关性研讨 计算学剖析标明，Hp感染与胃癌安排中p27蛋白表达的相关性研讨呈负相关（r=-0.486，P<0.05），见表2。 3 评论 Hp感染是胃癌发作开展的Ⅰ类致病原，Hp具有黏附性，排泄的毒素有致病性，导致胃黏膜病变，Hp仍是一种硝酸盐还原剂，具有催化亚硝化效果而引起致癌效果，发作癌变的次序为：缓慢炎症——萎缩性胃炎——萎缩性胃炎伴肠化——异型增生——癌变[8]，但Hp感染引起胃癌发作并非单一机制所造成的，与人体内癌基因的激活和骤变及抑癌基因的失活有关，与胃癌发作相关的癌基因包括ras基因、c-myc和Bcl-2活化[9]，抑癌基因包括野生型P53、APC、DCC、p27等。p27是近些年发现的新的CKI基因[10] （细胞周期蛋白依赖性激酶按捺剂，cyclin-dependent kinase inhibitors）， p27包括两个有编码功用的外显子和一个无功用的外显子及一个内含子，定坐落人体12p13交界处，研讨发现[11]，p27蛋白具有多种生物学功用，可直接按捺Cyclin-CDK（细胞周期素-细胞周期蛋白依赖性激酶）复合物的生物学活性然后阻挠细胞经过G1/S期变换的“关卡”[12]，一起还可以作为细胞外影响信号的潜在前言来调控细胞周期[13]，p27作为细胞周期的负性调控因子，被以为是一种抑癌基因，具有按捺肿瘤的发作、开展的效果。在对乳腺癌、肺癌、和内排泄肿瘤的研讨中发现p27蛋白表达与肿瘤的成长、分解、搬运及预后等密切相关[14]。本试验成果显现：Hp阳性表达率呈递减时，而p27蛋白表达呈升高趋势，计算学剖析标明，Hp感染与胃癌安排中p27蛋白表达呈负相关，这一成果阐明，Hp 感染可引起胃黏膜抑癌基因 p27 表达下降或缺失，然后导致胃黏膜癌变的发作，其机制可能为，Hp感染可能使p27在胃癌的开展进程中逐步丧失了作为细胞周期负调控因子的抑癌效果，导致胃癌发作，一起p27下降可引起细胞外基质和细胞黏附性下降[15]，然后导致肿瘤滋润、搬运。这也可能是Hp感染引起胃癌发作的机制之一。 [参考文献] [1] 邹小农，孙喜斌，陈万青，等. 2003～2007 年我国胃癌发病与逝世状况剖析[J]. 肿瘤，2012，32（2）：109-114. [2] 陈清波，王洪波，徐明垚，等. 缓慢胃病伴肠上皮化生、胃癌与幽门螺旋杆菌感染的联系[J]. 有用癌症杂志，2010， 25（2） ： 169-171. [3] 杜中红，魏晓萍，惠来源，等. 胃癌前病变癌变机制及筛查研讨开展[J].现代肿瘤医学，2010，18（4）：814-816. [4] 陆再英，钟南山. 内科学[M]. 第7版.北京：公民卫生出版社，2008：396. [5] Coqueret O. New roles for p21 and p27 cell cycle inhibition：A fuction for each cell compartment[J]. Trenda Cell Bid， 2003，13（2）： 65-70. [6] 王建馗，冯义朝. 幽门螺杆菌感染与胃癌部分滋润的相关性[J]. 世界华人消化杂志，2010，18（3） ： 268-271. [7] 苏连明，艾 江，孔祥红. 结直肠癌PTEN基因表达及与P-ERK相关性研讨，我国安排化学与细胞化学杂志[J].2012，21（3）：300-303. [8] 赵红燕，张凤荣，单恩忠. 萎缩性胃炎 Hp 感染阳性率和Ki -67增殖的相关性研讨[J]. 我国医疗前沿，2010，5（8） ： 1-2. [9] Yu XW，Xu Y，Gong YH，et al. Helicobacter pylori induces malignant transformation of gastric epithelial cells in vitro[J]. APMIS，2011，119（3）：187-197. [10] 张广建，寇有为，王强. 胃癌安排中p27表达与cyclinD1，cyclinE表达的相关性[J]. 世界华人消化杂志，2007，15（36）：3809-3814. [11] Wei Z，Jiang X，Qiao H，et al. STAT3 interacts with Skp2/p27/p21 pathway to regulate the motility and invasion of gastric cancer cells[J]. Cell Signal，2013，25（4）：931-938. [12] 李胜水，许华，杨晶. p27和ILK在胃癌及癌前病变中的表达及含义[J]. 现代肿瘤医学，2010，18（1）：128-130. [13] Sgambato A，Migaldi M，Leocata P，et al. Loss of p27kip1 expresssion is a strong independent prognostic factor of reduced survival inno gastric carcinomas[J]. Cancer，2008， 89（11） ： 224-227. [14] Lee SR，Shin HO. Detemining the effect of transforming growth factor-B1 on odk4 and p27 in gastric cancer and cholangiocarcinoma[J]. Oncol Lett，2013，5（2）：694-698. [15] 王立辉，杨静玉，崔巍，等. 幽门螺杆菌感染与胃癌中p21和p27表达的联系[J]. 微生物学杂志，2008，28（2）： 40-43. （收稿日期：2014-03-13）
1.4 计算学处理
试验数据选用χ2查验，相关剖析选用Spearman等级相关剖析，以相联系数-1 2 成果 2.1 Hp检测成果 56例胃癌患者均行14C-UBT检测，仪器见封三图1。成果显现，Hp感染38例，感染率为67.9%。 2.2 p27蛋白表达与胃癌临床病理特征的联系 p27蛋白在胃癌安排中主要以细胞浆和（或）细胞核呈现棕黄色染色为主同，见封三图2。其表达率与患者的性别、年纪和肿瘤巨细无相关性（P>0.05），而与胃癌安排分解程度、滋润深度、淋巴结搬运和TNM分期密切相关（P<0.05），见表 1。 2.3 Hp感染与p27蛋白表达的相关性研讨 计算学剖析标明，Hp感染与胃癌安排中p27蛋白表达的相关性研讨呈负相关（r=-0.486，P<0.05），见表2。 3 评论 Hp感染是胃癌发作开展的Ⅰ类致病原，Hp具有黏附性，排泄的毒素有致病性，导致胃黏膜病变，Hp仍是一种硝酸盐还原剂，具有催化亚硝化效果而引起致癌效果，发作癌变的次序为：缓慢炎症——萎缩性胃炎——萎缩性胃炎伴肠化——异型增生——癌变[8]，但Hp感染引起胃癌发作并非单一机制所造成的，与人体内癌基因的激活和骤变及抑癌基因的失活有关，与胃癌发作相关的癌基因包括ras基因、c-myc和Bcl-2活化[9]，抑癌基因包括野生型P53、APC、DCC、p27等。p27是近些年发现的新的CKI基因[10] （细胞周期蛋白依赖性激酶按捺剂，cyclin-dependent kinase inhibitors）， p27包括两个有编码功用的外显子和一个无功用的外显子及一个内含子，定坐落人体12p13交界处，研讨发现[11]，p27蛋白具有多种生物学功用，可直接按捺Cyclin-CDK（细胞周期素-细胞周期蛋白依赖性激酶）复合物的生物学活性然后阻挠细胞经过G1/S期变换的“关卡”[12]，一起还可以作为细胞外影响信号的潜在前言来调控细胞周期[13]，p27作为细胞周期的负性调控因子，被以为是一种抑癌基因，具有按捺肿瘤的发作、开展的效果。在对乳腺癌、肺癌、和内排泄肿瘤的研讨中发现p27蛋白表达与肿瘤的成长、分解、搬运及预后等密切相关[14]。本试验成果显现：Hp阳性表达率呈递减时，而p27蛋白表达呈升高趋势，计算学剖析标明，Hp感染与胃癌安排中p27蛋白表达呈负相关，这一成果阐明，Hp 感染可引起胃黏膜抑癌基因 p27 表达下降或缺失，然后导致胃黏膜癌变的发作，其机制可能为，Hp感染可能使p27在胃癌的开展进程中逐步丧失了作为细胞周期负调控因子的抑癌效果，导致胃癌发作，一起p27下降可引起细胞外基质和细胞黏附性下降[15]，然后导致肿瘤滋润、搬运。这也可能是Hp感染引起胃癌发作的机制之一。 [参考文献] [1] 邹小农，孙喜斌，陈万青，等. 2003～2007 年我国胃癌发病与逝世状况剖析[J]. 肿瘤，2012，32（2）：109-114. [2] 陈清波，王洪波，徐明垚，等. 缓慢胃病伴肠上皮化生、胃癌与幽门螺旋杆菌感染的联系[J]. 有用癌症杂志，2010， 25（2） ： 169-171. [3] 杜中红，魏晓萍，惠来源，等. 胃癌前病变癌变机制及筛查研讨开展[J].现代肿瘤医学，2010，18（4）：814-816. [4] 陆再英，钟南山. 内科学[M]. 第7版.北京：公民卫生出版社，2008：396. [5] Coqueret O. New roles for p21 and p27 cell cycle inhibition：A fuction for each cell compartment[J]. Trenda Cell Bid， 2003，13（2）： 65-70. [6] 王建馗，冯义朝. 幽门螺杆菌感染与胃癌部分滋润的相关性[J]. 世界华人消化杂志，2010，18（3） ： 268-271. [7] 苏连明，艾 江，孔祥红. 结直肠癌PTEN基因表达及与P-ERK相关性研讨，我国安排化学与细胞化学杂志[J].2012，21（3）：300-303. [8] 赵红燕，张凤荣，单恩忠. 萎缩性胃炎 Hp 感染阳性率和Ki -67增殖的相关性研讨[J]. 我国医疗前沿，2010，5（8） ： 1-2. [9] Yu XW，Xu Y，Gong YH，et al. Helicobacter pylori induces malignant transformation of gastric epithelial cells in vitro[J]. APMIS，2011，119（3）：187-197. [10] 张广建，寇有为，王强. 胃癌安排中p27表达与cyclinD1，cyclinE表达的相关性[J]. 世界华人消化杂志，2007，15（36）：3809-3814. [11] Wei Z，Jiang X，Qiao H，et al. STAT3 interacts with Skp2/p27/p21 pathway to regulate the motility and invasion of gastric cancer cells[J]. Cell Signal，2013，25（4）：931-938. [12] 李胜水，许华，杨晶. p27和ILK在胃癌及癌前病变中的表达及含义[J]. 现代肿瘤医学，2010，18（1）：128-130. [13] Sgambato A，Migaldi M，Leocata P，et al. Loss of p27kip1 expresssion is a strong independent prognostic factor of reduced survival inno gastric carcinomas[J]. Cancer，2008， 89（11） ： 224-227. [14] Lee SR，Shin HO. Detemining the effect of transforming growth factor-B1 on odk4 and p27 in gastric cancer and cholangiocarcinoma[J]. Oncol Lett，2013，5（2）：694-698. [15] 王立辉，杨静玉，崔巍，等. 幽门螺杆菌感染与胃癌中p21和p27表达的联系[J]. 微生物学杂志，2008，28（2）： 40-43. （收稿日期：2014-03-13）
