王云峰
[摘要]意图 树立穿心莲注射液中穿心莲内酯的高效液相色谱法含量测定办法。办法 选用高效液相色谱法测定含量，色谱柱：Agilent TC-C18柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）；活动相：甲醇-水（50∶50）；检测波长：224 nm；流速：1.0 ml/min。成果 穿心莲内酯在0.02 022～0.1011 mg/ml（r=0.9999）内呈杰出的线性联系，均匀收回率（n=6）为99.1%（RSD=1.1%）。定论 树立的测定穿心莲内酯的办法精确有用，有助于进一步完结穿心莲注射液的质量操控办法。
[关键词]高效液相色谱法；穿心莲注射液；穿心莲内酯；含量
[中图分类号] R917 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2017）09（c）-0073-03
[Abstract]Objective To establish the HPLC method for determination of Andrographolide content in Chuanxinlian Injection.Methods HPLC was used in content determination，the chromatographic column was Agilent TC-C18 （4.6 mm×150 mm，5 μm），the mobile phase consisted of methanol-water （50：50），the detection wavelength was 224 nm and the flow rate was 1.0 ml/min.Results The good linear relation was maintained when Andrographolide was from 0.02 022 to 0.1011 mg/ml （r=0.9999）.The average recovery was 99.1% （n=6，RSD=1.1%）.Conclusion The method of determination of Andrographolide is accurate and effective，which can help to complete the quality control method of Andrographolide Injection.
[Key words]HPLC method；Chuanxinlian Injection；Andrographolide；Content
穿心莲注射液是由穿心莲的乙醇提取物制成的注射液，收载于《卫生部药品规范》中药成方制剂第十九册，具有清热解毒的成效，首要用于咽喉胀痛、肺热咳嗽、热痢，亦可用于上呼吸道感染、细菌性痢疾等。穿心莲注射液中的首要有用成分穿心莲内酯（Andrographolide），是爵床科植物穿心莲Andrographis paniculata （Burm.f.）Nees的有用成分之一，具有抗菌、消炎、止咳平喘、清热解毒、凉血消肿等效果，广泛用于上呼吸道、消化道细菌感染所引起的各种疾病[1-6]。现行质量规范选用紫外分光光度法测定穿心莲内酯含量，操作繁琐，且显色时刻的长短对测定成果影响较大。本试验选用HPLC法对穿心莲注射液中有用成分穿心莲内酯的含量进行测定，通过很多试验研讨，树立了穿心莲内酯的HPLC剖析办法，办法精确有用，现报导如下。
1仪器与试药
Agilent1100型高效液相色谱仪含真空脫气机、低压四元泵、自动进样器和VWD检测器（美国安捷伦公司）；AUW120D型电子天平（日本岛津公司）；SK8200LH型超声仪（昆山超声仪器有限公司）；穿心莲内酯对照品（我国食品药品检定研讨院，批号：110797-201509）；穿心莲注射液（海南制药厂有限公司，批号：150104、150201、150914）。甲醇（色谱纯），水（超纯水）。
2办法与成果
2.1色谱条件
色谱柱：Agilent TC-C18（4.6 mm×150 mm，5 μm）；活动相∶甲醇-水（50∶50）；流速：1.0 ml/min；检测波长：224 nm；进样量：10 μl[7-12]。
2.2线性联系
精细称取穿心莲内酯对照品10.11 mg，置50 ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液，别离精细量取对照品贮备液1、2、3、4、5 ml，置10 ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。精细量取上述溶液10 μl，别离注入液相色谱仪，记载色谱图（图1～2）。以浓度（mg/ml）为横坐标，峰面积（mAU）为纵坐标，得穿心莲内酯的线性回归方程为：Y=23822X-15.01（n=5），r=0.9999，成果标明穿心莲内酯在0.02 022～0.1011 mg/ml线性联系杰出。
2.3空白试验
依照药品质量规范项下的制备工艺，克己不含穿心莲药材的产品作为阴性样品，并按供试溶液的制备办法制成阴性样品溶液。依照“2.1”项下的色谱条件进样，成果显现阴性样品溶液在穿心莲内酯的样品峰处无搅扰峰，标明本试验树立的办法对穿心莲内酯的含量测定无搅扰（图3）。
2.4安稳性试验
取供试品溶液，在0、3、6、9、12 h内重复进样5次，每次10 μl，峰面积的RSD=0.6%，标明供试品溶液在12 h内安稳。
2.5重复性试验
取同一批号样品，按样品含量测定测定项下办法重复测定5份，得穿心莲内酯含量的RSD=0.8%，标明重复性杰出。
2.6精细度试验
精细汲取线性联系规模项下对照品溶液10 μl，重复进样5次，记载对照品峰面积，核算峰面积的RSD=0.7%，标明精细度杰出。endprint
2.7加样收回试验
精细量取已知含量的供试品2 ml六份，别离置10 ml量瓶中，别离精细参加规范曲线对照品贮备液0.5、0.5、1.5、1.5、2.5、2.5 ml，加甲醇稀释至刻度，摇匀。精细量取上述溶液10 μl，别离注入液相色谱仪，记载峰面积，核算均匀收回率（表1）。
2.8样品测定
别离精细量取3个批号的穿心莲注射液（批号：150104、150201、150914）各2 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精细称取穿心莲内酯对照品10 mg，置50 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精细量取3 ml，置10 ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。别离精细量取10 μl注入液相色谱仪，测定峰面积，按外标法核算穿心莲内酯的含量，成果别离为1.2、1.1、0.9 mg。
3评论
3.1本文树立的办法与原查验规范的比较
在穿心莲注射液现行查验规范中，一般选用紫外分光光度法，通过显色反响来测定穿心莲内酯含量，操作繁琐，且吸光度值不安稳，通过试验证明，吸光度会跟着时刻推移呈敏捷下降趋势，这样必然会形成测定成果的不精确。而且比色法专特点不强，简单给一些不法分子供给造假时机。本研讨提出的HPLC法可直接测定注射液中穿心莲内酯的含量，办法简洁、快速、精确，可作为该制剂的含量操控办法。
3.2穿心莲内酯与脱水穿心莲内酯含量的动态改变
穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯在制剂生产过程中会呈现动态改变，且不同的提取和生产工艺对穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的搬运率有较大的影响[13-16]，本研讨组方案鄙人一步试验中进一步调查本制剂中脱水穿心莲内酯的含量及两者的联系[17-18]。
3.3办法耐用性调查
通过替换色谱柱Sunfire C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）和Agilent Eclipse XDB C18（4.6 mm×250 nm，5 μm）试验，成果得到杰出的色谱图及重现性，且所得含量共同。
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