黄秋玲等
[摘要] 意图 了解湖州市2013～2014年手足口病病原构成及其临床相关特征。 办法 搜集208例疑似手足口病感染者的253份标本（咽拭子45份和粪便208份）和相关临床材料，选用一步法三色荧光定量RT-PCR检测临床样本。 成果 一步法荧光定量RT-PCR检测标明，208例手足口病患儿中，EV的检出率为83.17%（173/208），其间EV71、CoxA16和其他EV亚型所占EV的份额分别为55.49%、13.29%和31.21%，且男、女患儿之间的检测成果并无显着差异。5岁及以下（≤5岁）手足口病患儿中，首要的病原为EV71，而5岁以上以其他EV亚型为主；临床症状以发热伴疱疹为手足口病的首要症状，而引起发热伴吐逆、疱疹或神经系统症状的首要肠道病毒为EV71。此外粪便样本的EV检出率高于咽拭子样本的EV检出率。 定论 肠道病毒EV71和其他EV亚型是湖州市儿童手足口病的优势病原体，而CoxA16病毒呈现下降趋势，因而加强EV、EV71和CoxA16的监测有助于更好地防备和操控手足口病。
[关键词] 手足口病；肠道病毒71型；柯萨奇病毒A16型
[中图分类号] R512.5 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2015）13-0044-03
[Abstract] Objective To explore the pathogens and clinical characterization of hand， foot and mouth disease （HFMD） in Huzhou city from 2013 to 2014. Methods All 253 specimens included 208 stool specimens and 45 throat swabs， and clinical data from 208 children cases with hand， foot and mouth diseases（HFMD） were collected. Preliminary detection for all of the specimens was performed by one-step triple real-time RT-PCR assay. Results Real-time RT-PCR assay indicated that the positive rate of Enterovirus（EV）from 208 cases was 83.17% （173/208）， and the percentages of EV71， CoxA16 and others EV subtypes in 173 enteroviruses were 55.49%， 13.29% and 31.21%， respectively. These results were not significant differences between male and female children. EV71 from children with HFMD was predominant strain below 5 old years （≤5）， and others EV subtypes were predominant strains over 5 years （>5）. Of fever with herpes was main clinical symptom in patients with HFMD， and EV71 was primary enterovirus induced many clinical features， such as fever with herpes or vomiting or neurological symptoms and so on. Additionally， detection rate of EV in stool specimens was significant higher than that in throat swabs. Conclusion EV71 and others EV subtypes are predominant strains， CoxA16 strains have a downtrend in patients with HFMD in Huzhou city， so that the medical workers should improve the ability of surveillance to EV，EV71 and CoxA16 in order to make better for control and prevention of the HFMD diseases.
[Key words] Hand， foot and mouth disease； Enterovirus 71； Coxsackie A16
手足口病（hand， foot and mouth disease， HFMD）是由多种肠道病毒（enterovirus， EV）引起的常见盛行症，多发于婴幼儿。大大都患者临床症状较轻，可引起发热和手、足、口腔等部位的皮疹或疱疹等症状，单个患者可引起心肌炎、无菌性脑膜脑炎等并发症[1，2]。该病一般由肠道病毒71型 （EV71）、柯萨奇病毒 （Cox）A4、A5、A16和B1、B3等肠道病毒引起，EV71和CoxA16 型最为常见[2，3]。
EV71和CoxA16感染所引起的手足口病在临床上难以差异，特别是EV71可以引起中枢神经系统疾病，并且近年来，EV71在亚太区域的盛行呈上升趋势，并呈现逝世病例，因为CoxA16与心肌炎、心包炎等疾病相关而逐步遭到重视[4，6]。
为了解湖州市区手足口病的状况，咱们搜集了2013年5月～2014年7月期间共208例疑似手足口病感染者的253份不同类型的标本和相应的临床材料，选用一步法三色荧光定量RT-PCR办法进行开始检测剖析。
1 目标与办法
1.1 研讨目标
依据《手足口病医治攻略（2013年版）》确诊规范，从湖州市中心医院和湖州市第一人民医院搜集208例临床开始确诊为手足口病感染者的253份标本（咽拭子45份和粪便208份），其间男116例，女92例，年纪10个月～7岁，均匀（2.65±1.56）岁。一起搜集患者相应的临床材料，标本搜集后置-80℃冰箱冻存待检。
1.2 试剂和仪器
QIAamp Viral RNA Mini Kit（Cat：57704）病毒RNA核酸提取试剂盒购自Qiagen公司，手足口病EV71、CA16及通用型肠道病毒核酸检测试剂盒（荧光PCR法）（HRP0011）购自江苏默乐生物科技有限公司，ABI7500 PCR仪为美国ABI公司出产。
1.3 办法
1.3.1 RNA核酸提取 依据QIAamp Viral RNA Mini Kit的操作阐明书提取临床搜集样本的RNA核酸，搜集RNA提取液终体积为50μL，-80℃保存备用。
1.3.2 一步法荧光定量RT-PCR扩增 依据手足口病EV71、CA16及通用型肠道病毒核酸检测试剂盒（荧光PCR法）的操作阐明书进行试剂的装备和核酸检测。扼要阐明如下：反响体系为：RT-PCR 缓冲液为12.5 μL，Taq酶0.5 μL，RT酶0.5 μL，引物和探针6.5 μL，核酸5 μL；一步法RT-PCR扩增条件：45℃ 15 min，95℃ 2 min，40个循环（94℃ 10 s，60℃10 s）。荧光信号的搜集定为FAM（肠道病毒）、ROX（CoxA16）、HEX（EV71），数据的搜集设在60℃。
1.4 统计学剖析
选用SPSS13.0软件进行统计学剖析。不同年纪、性别、临床症状和样本类型等材料选用χ2查验，P<0.05标明差异有统计学含义。
2 成果
2.1 不同性别和年纪患儿的病原剖析
对208例临床确诊为手足口病感染的患儿标本进行一步法荧光定量RT-PCR检测，EV的检出率为83.17%（173/208），其间EV71所占EV的份额最高为55.49%（96/173），而其他EV亚型的份额（31.21%，54/173）也显着高于CoxA16的份额（13.29%，23/173）。
116例男性和92例女人患儿中，EV的检出率分别为81.03%（94/116）和85.87%（79/92）；其间以EV71所占份额最高，分别为58.51%（55/94）和51.90%（41/79）；而CoxA16所占份额为最低，分别为11.70%（11/94）和15.19%（12/79）；其他EV亚型的份额分别为29.79%（28/94）和32.91%（26/79）。见表1。
此外，在5岁及以下（≤5岁）和5岁以上（>5岁）的患儿中，EV的检出率分别为86.81%（158/182）和57.69%（15/26）；其间EV71所占的份额分别为55.70%（88/158）和33.33%（5/15）；其他EV亚型的份额分别为30.38%（48/158）和60.00%（9/15）；而CoxA16所占份额为最低，分别为13.92%（22/158）和6.67%（1/15）。见表1。
2.2 不同临床症状中的病原剖析
208例患儿中，大都患儿呈现发热症状，其间发热伴疱疹最多为112例，其次发热伴吐逆有36例，发热伴神经系统症状有26例，其他状况有34例；引起患儿呈现发热伴疱疹症状的首要病原为EV71（58.42%，59/101），其次为其他EV亚型病毒（26.73%， 27/101），而CoxA16最少（14.85%，15/101）；引起患儿呈现发热伴吐逆症状的首要病原为EV71（56.67%，17/30）；引起患儿呈现发热伴神经系统症状的首要病原为EV71（72.22%，13/18）；引起患儿呈现不典型的其他症状的首要病原为其他EV亚型病毒（62.5%，15/25）。见表2。
2.3 不同样本的病原剖析
253份临床标本中，208份粪便中EV的检出率为76.92%（160/208）。其间EV71、CoxA16和其他EV亚型的所占份额分别为52.50%（84/160）、14.38%（23/160）和33.13%（53/160）；45份咽拭子中EV的检出率为51.11%（23/45），其间EV71所占份额最高为65.22%（15/23），其次是其他EV亚型为26.09%（6/23），CoxA16所占份额最低为8.70%（2/23）。见表3。
3 评论
手足口病是由多种肠道病毒引起的小儿常见盛行症。肠道病毒归于小RNA病毒科，依据血清学可分为柯萨奇、埃可病毒、脊髓灰质炎病毒和肠道病毒68-71型等，共67个血清型[2，3，7]，其间尤以EV71和CoxA16型最为常见。
本次研讨中，208例疑似手足口病患儿中，一步法荧光定量RT-PCR检测成果显现，EV71阳性病例数占肠道病毒的份额与近年杭州报导的成果相共同[8]。而其他EV亚型（即非EV71和非CoxA16）的阳性百分比显着高于CoxA16的份额，这些成果标明EV71的盛行仍是引起手足口病的首要病原，但其他EV亚型的盛行趋势有所升高，值得亲近重视，并与国内其他区域的报导根本共同[9]。
不同年纪患儿的检测成果显现，疑似手足口病患儿的感染以5岁以下儿童为主，显着高于5岁以上患儿。5岁以下患儿EV71的检出百分比显着高于CoxA16和其他EV亚型，而5岁以上患儿其他EV亚型检出百分比最高。此外手足口病患儿的感染尽管无男女人其他显着差异，但其他EV的检出百分比显着高于浙江湖州区域的相关报导[10]，与国表里其他区域的报导根本共同[11-13]。
手足口病患儿的临床确诊首要依据临床症状进行开始确诊，咱们的成果标明，发热伴疱疹症状仍然是首要的临床症状，EV71是引起发热伴疱疹症状的首要病原，其次是其他EV亚型的肠道病毒，而CoxA16病毒相对较少。手足口病的传达首要经过粪-口和（或）亲近接触传达，患者的咽拭子和粪便中均可检测出EV71、CoxA16和其他EV亚型的肠道病毒。Ooi MH等[14]研讨标明，不同的临床标本对手足口病相关的肠道病毒的检出有着必定的不同，在潜伏期可经过患者的粪便和咽拭子标本检测到肠道病毒[14]。本研讨中，咱们发现在咽拭子和粪便样本中均检测出肠道病毒。粪便中EV71的检出率高于咽拭子样本，但CoxA16和其他EV亚型的检出率在咽拭子和粪便样本中并无显着差异，标明EV71型病毒的活泼程度较强；与国内相关的报导存在必定差异[9-11，15]。
以上剖析标明，因为婴幼儿的免疫系统没有彻底发育老练，体内并无相应的保护性抗体，然后导致机体的抵抗力相对较差，简单遭到肠道病毒的感染。由EV71、CoxA16和其他EV亚型的肠道病毒引起的手足口病在不同区域、不同年份间的发病率存在必定的差异，不同年纪、不同的样本类型和采样时刻也可能会导致检测成果存在必定的误差，因而需求依据患儿的病况搜集适宜的标本类型，亲近地对婴幼儿特别是5岁以下婴幼儿进行肠道病毒的病原学检测和分型。
手足口病的医治现在尚无特效的抗病毒医治药物，因而加强对肠道病毒特别是EV71和CoxA16及其他EV亚型的监测和辨别确诊，使临床医师可以早发现、早确诊、早医治，关于防备操控手足口病的盛行和爆发至关重要。
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（收稿日期：2014-12-30）
