宋劲燕+曹建英
[摘要] 意图 树立罗氟司特原猜中残留溶剂的测定办法。 办法 罗氟司特中异丙醇、乙酸乙酯和N，N-二甲基甲酰胺（DMF）的残留量选用顶空进样气相色谱法，运用DB-624毛细管柱，FID检测器。选用程序升温法测定，氮气为载气，流速为2.5 ml/min，以二甲基亚砜（DMSO）为溶剂。 成果 被测溶剂均能得到杰出的别离，异丙醇的浓度在199.4～598.1 μg/ml范围内线性关系杰出，r=0.9998，均匀回收率为96.3%，RSD为2.13%；乙酸乙酯的浓度在200.1～600.2 μg/ml范围内线性关系杰出，r=0.9996，均匀回收率为98.8%，RSD为1.79%；DMF的浓度在35.2～105.5 μg/ml范围内线性关系杰出，r=0.9997，均匀回收率为98.8%，RSD为2.42%。 定论 该办法可以精确测定罗氟司特中的残留溶剂，可用于罗氟司特质料药有机溶剂的检测。
[关键词] 顶空进样气相色谱法；罗氟司特；残留溶剂
[中图分类号] O657.7+1[文献标识码] A[文章编号] 1674-4721（2014）04（c）-0058-03
Residual solvents of roflumilast determined by headspace capillary gas chromatography
SONG Jin-yan CAO Jian-ying
Tianjin Nankai Yungong Pharmaceutical Science and Technology Co.,Ltd.,Tianjin 300384,China
[Abstract] Objective To establish a method for the determination of residual solvents in roflumilast material. Methods The residual solvents of isopropanol,ethyl acetate and N,N-dimethylformamide in roflumilast were determined by headspace gas chromatography,and DB-624 capillary column,FID detector were used.The column was subjected totemperature programming,the carrier gas was nitrogen,the flow rate was 2.5 ml/min,the solvent was dimethyl sulfoxide(DMSO). Results The result shows that the solvents were completely separated.The standard curves of isopropanol was linear in the concentration range of 199.4-598.1 μg/ml,r=0.9998,the average recovery was 96.3%,with RSD of 2.13%.The standard curves of ethyl acetate was linear in the concentration range of 200.1-600.2 μg/ml,r=0.9996,theaverage recovery rate was 98.8%,with RSD of 1.79%.The standard curves of N,N-dimethylformamide waslinear in the concentration range of 35.2-105.5μg/ml,r=0.9997,the average recovery rate was 98.8%,with RSD of 2.42%. Conclusion This method is proved to be accurate and reliable for the accurate determination of residual solvents in roflumilast.It can be used in the detection for the organic solvent of roflumilast crude drug.
[Key words] Headspace gas chromatography;Roflumilast;Residual solvents
罗氟司特是由Nycomed公司出产上市的磷酸二酯酶-4 （ PDE-4） 抑制剂，商品名Daxas。2011年2月28日，罗氟司特经美国FDA 同意上市，用于缓慢阻塞性肺病（COPD）的医治。本品为挑选性PDE-4抑制剂，是10多年来初次取得欧盟同意的新一类医治COPD的药物。本品为一日1 次用药的口服片剂，须与其他支气管扩张药合用，适用于有频频加剧病史的成人患者缓慢支气管炎相关严峻COPD的坚持医治。研讨证明，本品可明显改进患者中至重度加剧发作和舒张前FEV1，不论是否与长效β2 激动剂联用。研讨还证明，与安慰剂比较，本品可明显改进患者的肺功用。本品在组成、精制进程顶用到了ICH约束的溶剂，包含三类溶剂异丙醇和乙酸乙酯和及二类溶剂N，N-二甲基甲酰胺（DMF）。本文依照我国药典2010年版[1]与ICH[2-3]相关要求，树立了顶空气相色谱法测定该药中异丙醇、乙酸乙酯、DMF的残留量[4-9]。
1 仪器与试剂
Agilent 7820 A气相色谱仪、Agilent 7697 A顶空自动进样设备、安捷伦色谱工作站；赛多利斯BP211D电子剖析天平。异丙醇、乙酸乙酯、DMF、二甲基亚砜（DMSO）均为剖析纯。罗氟司特质料样品由天津南开允公医药科技有限公司供给。
2 办法与成果
2.1 气相色谱条件
色谱柱为DB-624（30 m×0.32 mm，1.80 μm），柱温选用程序升温：30℃坚持6 min，以10℃/min升温至120℃后，再以20℃/min升温至220℃，坚持10 min；选用氮气作为载气，流速为2.5 ml/min，分流比为5∶1；检测器为FID，温度为250℃；顶空平衡温度为110℃，平衡时刻为45 min，进样口温度为200℃，进样体积为1 ml。
2.2 溶液制造
2.2.1 对照品溶液的制备精细称取异丙醇、乙酸乙酯和DMF各适量，加DMSO溶解并稀释制成每1 ml中约含异丙醇0.5 mg、乙酸乙酯0.5 mg、DMF0.088 mg的溶液，精细量取2 ml，置顶空瓶中，密封，作为对照品溶液。
2.2.2 供试品溶液的制备取本品，精细称定，加二甲基亚砜溶解并稀释制成每1 ml约含0.1 g的溶液，精细量取2 ml，置顶空瓶中，密封，作为供试品溶液。
2.3 体系适用性实验
取本品对照品溶液，依法测定，接连进样5次，记载色谱图，由图1可知，各溶剂峰均能分隔，峰形杰出。异丙醇、乙酸乙酯和DMF各溶剂峰面积的RSD别离为1.69%、1.75%和2.33%。
图1 对照品溶液色谱图
2.4线性关系调查
加DMSO溶解并稀释制成每1 ml中含异丙醇5.0 mg、乙酸乙酯5.0 mg、DMF0.88 mg的混合溶液。精细量取0.4、0.6 、0.8、1.0、1.2 ml别离置10 ml量瓶中，加DMSO稀释至刻度，摇匀，依法查看。以浓度C为横坐标，以峰面积A为纵坐标进行线性回归，成果见表1。
表1 线性实验成果
2.5 精细度实验
供试品溶液参加100%指示浓度的各试剂，制备6份，顺次测定，记载色谱图。异丙醇、乙酸乙酯和DMF各溶剂回收率的RSD别离为2.13%、1.79%和2.42%（表2）。
表2 精细度查看成果
2.6 中心精细度实验
另一剖析人员独立树立体系，供试品溶液参加100%指示浓度的各试剂，制备6份，顺次测定，记载色谱图。异丙醇、乙酸乙酯和DMF各溶剂回收率的RSD别离为1.03%、1.50%和1.49%。两人之间回收率的RSD别离为1.86%、1.64%和1.93%，故该办法的重现性杰出（表3）。
表3 中心精细度查看成果
2.7 回收率实验
精细称取异丙醇、乙酸乙酯、DMF适量，加供试品溶液溶解，并稀释制成每1 ml中含异丙醇5 mg、乙酸乙酯5 mg、DMF 0.88 mg的溶液，精细量取上述溶液0.8、1.0、1.2 ml别离置10 ml量瓶中，加供试品稀释至刻度，摇匀，作为回收率测定供试品溶液；另取对照品溶液和供试品溶液，依法测定。异丙醇、乙酸乙酯和DMF各溶剂均匀回收率别离为96.3%、98.8%和98.8%， RSD别离为2.13%、1.79%和2.42%（表4~表6）。
表4 残留溶剂异丙醇测定回收率实验成果
表5 残留溶剂乙酸乙酯测定回收率实验成果
表6 残留溶剂N,N-二甲基甲酰胺测定回收率实验成果
2.8 检出限断定
精细称取异丙醇、乙酸乙酯和DMF各适量，别离加DMSO溶解并稀释制成每1 ml中含异丙醇0.5 mg、乙酸乙酯0.5 mg、DMF 0.088 mg的3种溶液。别离取以上3种溶液，逐级稀释，取信噪比为3∶1时的进样浓度作为检出限，异丙醇的检出限浓度为：0.299 μg/ml；乙酸乙酯的检出限浓度为0.102 μg/ml；DMF的检出限浓度为2.110 μg/ml。
2.9 样品测定
取本品3批依法查看，成果见表7。
表7 3批样品查看成果
3 评论
3.1 程序升温的挑选
异丙醇、乙酸乙酯、DMF3种溶剂中，异丙醇与乙酸乙酯的沸点十分挨近，在80℃左右，而DMF的沸点较高，到达150℃以上，为了到达有用的别离，选用了程序升温，在220℃时坚持10 min，确保溶媒DMSO悉数被吹出，不会影响下一次进样的测定。
3.2 溶媒的挑选
依据罗氟司特的溶解特性——在水中几乎不溶，一起考虑沸点与出峰时刻，选用DMSO作为溶媒，增加了本品的溶解度，提高了对残留溶剂检出的灵敏度，异丙醇、乙酸乙酯和DMF得到了比较抱负的别离。
综上所述，经过办法学调查，本办法专特点强，经过检测限的测定，阐明本办法有较高的灵敏度，可以确保对低极限的溶剂进行精确的测定。经过线性实验及回收率实验的测定，进一步阐明本品可以对残留溶剂进行精断定量。
[参考文献]
[1]国家药典委员会.我国药典.二部.[M].北京：我国医药科技出版社，2010：附录61.
[2]周海均.药品注册的世界技能要求·质量部分[M].北京：公民卫生出版社，2000.
[3]胡昌勤.药物残留溶剂剖析[Ｍ].北京：化学工业出版社，2008.
[4]张晓娟，朱晓斌.气相色谱法测定来曲唑中甲醇、异丙醇、叔丁醇、乙酸乙酯以及DMF的残留量[J].广东化工，2012，39（3）：166-167.
[5]顾红.药物组成进程中有机残留量的检测[J].天津化工，2004，18（6）：52-54.
[6]江冬英，胡巧云.顶空进样法测定更昔洛韦的残留溶剂[J].我国医药导报，2011，8（25）：56-58.
[7]林斌.气相色谱法测定他克莫司中的8种残留溶剂[J].海峡药学，2012，24（7）：60-62.
[8]陈丽萍，丁邦东，谭志刚，等.顶空气相色谱法测定醋酸地塞米松质料药中残留溶剂的含量[J].天津药学，2012， 24（1）：12-14.
[9]俞建君.气相色谱法测定奥氮平质料药中6种残留溶剂含量[J].广东化工，2011，10（38）：159-160.
（收稿日期：2014-03-12本文修改：许俊琴）
图1 对照品溶液色谱图
2.4线性关系调查
加DMSO溶解并稀释制成每1 ml中含异丙醇5.0 mg、乙酸乙酯5.0 mg、DMF0.88 mg的混合溶液。精细量取0.4、0.6 、0.8、1.0、1.2 ml别离置10 ml量瓶中，加DMSO稀释至刻度，摇匀，依法查看。以浓度C为横坐标，以峰面积A为纵坐标进行线性回归，成果见表1。
表1 线性实验成果
2.5 精细度实验
供试品溶液参加100%指示浓度的各试剂，制备6份，顺次测定，记载色谱图。异丙醇、乙酸乙酯和DMF各溶剂回收率的RSD别离为2.13%、1.79%和2.42%（表2）。
表2 精细度查看成果
2.6 中心精细度实验
另一剖析人员独立树立体系，供试品溶液参加100%指示浓度的各试剂，制备6份，顺次测定，记载色谱图。异丙醇、乙酸乙酯和DMF各溶剂回收率的RSD别离为1.03%、1.50%和1.49%。两人之间回收率的RSD别离为1.86%、1.64%和1.93%，故该办法的重现性杰出（表3）。
表3 中心精细度查看成果
2.7 回收率实验
精细称取异丙醇、乙酸乙酯、DMF适量，加供试品溶液溶解，并稀释制成每1 ml中含异丙醇5 mg、乙酸乙酯5 mg、DMF 0.88 mg的溶液，精细量取上述溶液0.8、1.0、1.2 ml别离置10 ml量瓶中，加供试品稀释至刻度，摇匀，作为回收率测定供试品溶液；另取对照品溶液和供试品溶液，依法测定。异丙醇、乙酸乙酯和DMF各溶剂均匀回收率别离为96.3%、98.8%和98.8%， RSD别离为2.13%、1.79%和2.42%（表4~表6）。
表4 残留溶剂异丙醇测定回收率实验成果
表5 残留溶剂乙酸乙酯测定回收率实验成果
表6 残留溶剂N,N-二甲基甲酰胺测定回收率实验成果
2.8 检出限断定
精细称取异丙醇、乙酸乙酯和DMF各适量，别离加DMSO溶解并稀释制成每1 ml中含异丙醇0.5 mg、乙酸乙酯0.5 mg、DMF 0.088 mg的3种溶液。别离取以上3种溶液，逐级稀释，取信噪比为3∶1时的进样浓度作为检出限，异丙醇的检出限浓度为：0.299 μg/ml；乙酸乙酯的检出限浓度为0.102 μg/ml；DMF的检出限浓度为2.110 μg/ml。
2.9 样品测定
取本品3批依法查看，成果见表7。
表7 3批样品查看成果
3 评论
3.1 程序升温的挑选
异丙醇、乙酸乙酯、DMF3种溶剂中，异丙醇与乙酸乙酯的沸点十分挨近，在80℃左右，而DMF的沸点较高，到达150℃以上，为了到达有用的别离，选用了程序升温，在220℃时坚持10 min，确保溶媒DMSO悉数被吹出，不会影响下一次进样的测定。
3.2 溶媒的挑选
依据罗氟司特的溶解特性——在水中几乎不溶，一起考虑沸点与出峰时刻，选用DMSO作为溶媒，增加了本品的溶解度，提高了对残留溶剂检出的灵敏度，异丙醇、乙酸乙酯和DMF得到了比较抱负的别离。
综上所述，经过办法学调查，本办法专特点强，经过检测限的测定，阐明本办法有较高的灵敏度，可以确保对低极限的溶剂进行精确的测定。经过线性实验及回收率实验的测定，进一步阐明本品可以对残留溶剂进行精断定量。
[参考文献]
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[5]顾红.药物组成进程中有机残留量的检测[J].天津化工，2004，18（6）：52-54.
[6]江冬英，胡巧云.顶空进样法测定更昔洛韦的残留溶剂[J].我国医药导报，2011，8（25）：56-58.
[7]林斌.气相色谱法测定他克莫司中的8种残留溶剂[J].海峡药学，2012，24（7）：60-62.
[8]陈丽萍，丁邦东，谭志刚，等.顶空气相色谱法测定醋酸地塞米松质料药中残留溶剂的含量[J].天津药学，2012， 24（1）：12-14.
[9]俞建君.气相色谱法测定奥氮平质料药中6种残留溶剂含量[J].广东化工，2011，10（38）：159-160.
（收稿日期：2014-03-12本文修改：许俊琴）
图1 对照品溶液色谱图
2.4线性关系调查
加DMSO溶解并稀释制成每1 ml中含异丙醇5.0 mg、乙酸乙酯5.0 mg、DMF0.88 mg的混合溶液。精细量取0.4、0.6 、0.8、1.0、1.2 ml别离置10 ml量瓶中，加DMSO稀释至刻度，摇匀，依法查看。以浓度C为横坐标，以峰面积A为纵坐标进行线性回归，成果见表1。
表1 线性实验成果
2.5 精细度实验
供试品溶液参加100%指示浓度的各试剂，制备6份，顺次测定，记载色谱图。异丙醇、乙酸乙酯和DMF各溶剂回收率的RSD别离为2.13%、1.79%和2.42%（表2）。
表2 精细度查看成果
2.6 中心精细度实验
另一剖析人员独立树立体系，供试品溶液参加100%指示浓度的各试剂，制备6份，顺次测定，记载色谱图。异丙醇、乙酸乙酯和DMF各溶剂回收率的RSD别离为1.03%、1.50%和1.49%。两人之间回收率的RSD别离为1.86%、1.64%和1.93%，故该办法的重现性杰出（表3）。
表3 中心精细度查看成果
2.7 回收率实验
精细称取异丙醇、乙酸乙酯、DMF适量，加供试品溶液溶解，并稀释制成每1 ml中含异丙醇5 mg、乙酸乙酯5 mg、DMF 0.88 mg的溶液，精细量取上述溶液0.8、1.0、1.2 ml别离置10 ml量瓶中，加供试品稀释至刻度，摇匀，作为回收率测定供试品溶液；另取对照品溶液和供试品溶液，依法测定。异丙醇、乙酸乙酯和DMF各溶剂均匀回收率别离为96.3%、98.8%和98.8%， RSD别离为2.13%、1.79%和2.42%（表4~表6）。
表4 残留溶剂异丙醇测定回收率实验成果
表5 残留溶剂乙酸乙酯测定回收率实验成果
表6 残留溶剂N,N-二甲基甲酰胺测定回收率实验成果
2.8 检出限断定
精细称取异丙醇、乙酸乙酯和DMF各适量，别离加DMSO溶解并稀释制成每1 ml中含异丙醇0.5 mg、乙酸乙酯0.5 mg、DMF 0.088 mg的3种溶液。别离取以上3种溶液，逐级稀释，取信噪比为3∶1时的进样浓度作为检出限，异丙醇的检出限浓度为：0.299 μg/ml；乙酸乙酯的检出限浓度为0.102 μg/ml；DMF的检出限浓度为2.110 μg/ml。
2.9 样品测定
取本品3批依法查看，成果见表7。
表7 3批样品查看成果
3 评论
3.1 程序升温的挑选
异丙醇、乙酸乙酯、DMF3种溶剂中，异丙醇与乙酸乙酯的沸点十分挨近，在80℃左右，而DMF的沸点较高，到达150℃以上，为了到达有用的别离，选用了程序升温，在220℃时坚持10 min，确保溶媒DMSO悉数被吹出，不会影响下一次进样的测定。
3.2 溶媒的挑选
依据罗氟司特的溶解特性——在水中几乎不溶，一起考虑沸点与出峰时刻，选用DMSO作为溶媒，增加了本品的溶解度，提高了对残留溶剂检出的灵敏度，异丙醇、乙酸乙酯和DMF得到了比较抱负的别离。
综上所述，经过办法学调查，本办法专特点强，经过检测限的测定，阐明本办法有较高的灵敏度，可以确保对低极限的溶剂进行精确的测定。经过线性实验及回收率实验的测定，进一步阐明本品可以对残留溶剂进行精断定量。
[参考文献]
[1]国家药典委员会.我国药典.二部.[M].北京：我国医药科技出版社，2010：附录61.
[2]周海均.药品注册的世界技能要求·质量部分[M].北京：公民卫生出版社，2000.
[3]胡昌勤.药物残留溶剂剖析[Ｍ].北京：化学工业出版社，2008.
[4]张晓娟，朱晓斌.气相色谱法测定来曲唑中甲醇、异丙醇、叔丁醇、乙酸乙酯以及DMF的残留量[J].广东化工，2012，39（3）：166-167.
[5]顾红.药物组成进程中有机残留量的检测[J].天津化工，2004，18（6）：52-54.
[6]江冬英，胡巧云.顶空进样法测定更昔洛韦的残留溶剂[J].我国医药导报，2011，8（25）：56-58.
[7]林斌.气相色谱法测定他克莫司中的8种残留溶剂[J].海峡药学，2012，24（7）：60-62.
[8]陈丽萍，丁邦东，谭志刚，等.顶空气相色谱法测定醋酸地塞米松质料药中残留溶剂的含量[J].天津药学，2012， 24（1）：12-14.
[9]俞建君.气相色谱法测定奥氮平质料药中6种残留溶剂含量[J].广东化工，2011，10（38）：159-160.
（收稿日期：2014-03-12本文修改：许俊琴）
