邹路遥 林国志
[摘要] 意图 研讨17β-E2单用或联合顺铂（DDP）效果于人卵巢癌细胞株 HO-8910裸鼠移植瘤的影响。办法 建立人卵巢癌HO-8910裸鼠皮下移植瘤模型，随机分红6组：A组（生理盐水组）、B组（低剂量17β-E2）、C组（高剂量17β-E2）、D组（顺铂5 mg/kg）、E组（低剂量17β-E2+顺铂）、F组（高剂量17β-E2+顺铂），每组5只。调查各组人卵巢癌裸鼠移植瘤的成长状况、各组裸鼠的体重改动。 成果 A组、B组、C组、D组、E组、F组裸鼠体重均添加，B组、C组、D组、E组、F组医治后裸鼠体重均比A组体重轻，但各组差异无计算学含义。B组、C组、D组、E组、F组移植瘤体积、瘤重均显着削减，其间E组、F组医治后比独自用药体积改动显着，两组比较较，F组移植瘤体积、瘤重均更小。 定论 高剂量17β-E2联合顺铂更具有按捺人卵巢癌裸鼠移植瘤成长的效果。
[要害词] 17β-E2；顺铂；卵巢癌；移植瘤
[中图分类号] R737.31 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2018）04-0039-04
[Abstract] Objective To study the effects of 17β-E2 alone or combined with cisplatin on the growth of transplanted tumor of human ovarian cancer cell line HO-8910 in nude mice. Methods Subcutaneously transplanted tumor model of human ovarian cancer HO-8910 was established and randomly divided into 6 groups： group A（normal saline group）， group B（low dose 17β-E2）， group C（high dose 17β-E2）， group D（cisplatin 5 mg/kg）， group E （low dose 17β-E2+cisplatin）， and group F（high dose 17β-E2+cisplatin）， with 5 mice in each group. The growth of transplanted tumor of human ovarian cancer in nude mice in each group was observed， and the changes of body weight of nude mice in each group were observed. Results The body weight of nude mice in group A， group B， group C， group D， group E and group F was increased， and the body weight of nude mice in group B， C， D， E and F after treatment was all lighter than that in group A， but there was no statistical significance in each group. In group B， group C， group D， group E and group F， the volume of transplanted tumor and the weight of tumor were decreased significantly， and the volume change in group E and group F after treatment was more significant than that of administration alone. Compared between the two groups， the tumor volume and tumor weight in group F were both lower. Conclusion High dose of 17β-E2 combined with cisplatin has a better inhibitory effect on the growth of transplanted tumor of human ovarian cancer in nude mice.
[Key words] 17β-E2； Cisplatin； Ovarian cancer； Transplanted tumor
卵巢癌是婦科常见的恶性肿瘤，由于前期无显着症状，大部分女人查体发现卵巢癌时，病况已处于中晚期阶段，超越5年生计率的卵巢癌患者仅有40%[1，2]。手术加术后辅佐化疗是首要医治手法。患者术后卵巢去势导致雌激素水平低下而出现绝经综合征，严重影响患者的术后生命质量。激素代替医治（Hormone replacement therapy，HRT）是改进卵巢去势妇女雌激素低下症状、进步生命质量的最佳办法。但上皮性卵巢癌患者术后运用HRT能否促进肿瘤复发尚存在争议。本文经过建立人卵巢癌HO-8910裸鼠皮下移植瘤模型，调查不同剂量17β-雌二醇（17β-E2）独自或与DDP联合运用对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的效果，从而为卵巢肿瘤防治研讨供给新办法和创始新途径。
1 材料与办法
1.1 材料
本研讨选用人卵巢癌细胞株HO-8910，来自于上海细胞生物所，是人上皮性肿瘤-卵巢浆液性囊腺癌。SPF等级裸小鼠BALB/c/nu/nu由中国医学科学院动物研讨所供给，均为雌性，4周龄，体重14～15 g，在无菌屏蔽环境中养殖，动物许可证号是SCXK（京）20060-0008。
1.2 办法
卵巢癌细胞株HO-8910，惯例办法复苏，调整细胞悬液浓度为2×107/mL。每只裸鼠后背部皮下均接种1处，每处0.2 mL，含有4×106个卵巢癌细胞。接种1周左右，裸鼠移植瘤长到约米粒大小时开端试验，用剪耳做标记法将30只裸鼠随机分红6组，每组5只：A组（对照组，接连21 d皮下打针生理盐水，每日剂量为0.2 mL）、B组（每日皮下打针1.3 μg低剂量17β-E2，每次剂量0.2 mL，接连21 d）、C组（每日皮下打针高剂量17β-E2 3.9 μg，每次打针剂量0.2 mL，接连21 d）、D组（每日腹腔打针顺铂5 mg/kg，每次0.2 mL，1次/7 d，共4次）、E组（每日皮下打针低剂量17β-E2 1.3 μg，接连21 d，在低剂量17β-E2医治的第1、7、14、21 d腹腔打针顺铂5 mg/kg，每次均为0.2 mL）、F组（每日皮下打针高剂量17β-E2 3.9 μg，接连21 d，在高剂量17β-E2 医治的第1、7、14、21 d腹腔打针顺铂5 mg/kg，每次均为0.2 mL）。每只裸鼠接种一点，调查裸鼠移植瘤的成长状况。
1.3调查目标
监测移植瘤接种成活率，给药期间每4日用游标卡尺丈量移植瘤长（a）、宽（b），按体积（V）=πab2/6核算瘤体积，制作移植瘤的成长曲线，每4天称取裸鼠体重1次。末次给药24 h后，选用脱臼法处死裸鼠。完好剥出瘤安排，并丈量移植瘤分量。一同调查瘤块状况及有无周围安排滋润。并核算裸鼠移植瘤的抑瘤率。
公式=×100%。 1.4 統计学处理
运用SPSS10.0 for Windows计算软件包进行数据相关剖析和计算，计量材料用（x±s）标明，选用t查验及单要素方差剖析、双要素方差剖析，P<0.05为差异有计算学含义。
2 成果
2.1 各组裸鼠一般状况及体重改动
卵巢癌细胞接种于裸鼠身上后，接种的裸鼠移植瘤成活率均为100%，一切裸鼠的后背部皮下均长出瘤体。前期移植瘤外表润滑，为圆形或椭圆形的实体瘤，后期逐步形状不规则，外表高低不平，可见许多的血管网替换衔接，多个结节交融一同。单个瘤体外表有出血坏死。各组裸鼠一般状况均较好，饮水进食正常，反响灵敏，活动正常，体重添加。用药前后各组裸鼠的体重无显着改动，经计算学剖析，差异无计算学含义（表1）。医治后两两比较，用药组裸鼠体重均比A组体重轻，各组比较，差异无计算学含义。
2.2 各组裸鼠肿瘤体积改动
医治过程中，A组移植瘤成长敏捷，其体积一向大于其他各组的体积，能够以为不一同间点丈量体积的差异有计算学含义（P<0.05）。医治完毕后，各组肿瘤体积与A组肿瘤体积比较，差异有计算学含义（P<0.05）。D、E、F组与A、B、C组比较较，差异有计算学含义（P<0.05）。D组、E组比较差异有计算学含义。D组、F组比较，差异有计算学含义（P=0.000）。F组体积显着小于E组，差异有计算学含义（P=0.000<0.05）。见表2。
2.3 不同药物对裸鼠移植瘤成长按捺效果
各医治组瘤重均比A组轻，成果标明各医治组移植瘤的瘤重均轻于A组。并且E组、F组的瘤重比D组轻。A组抑瘤率为0.00，B组抑瘤率为40.91%，C组抑瘤率为43.99%，D组抑瘤率为50.84%，E组抑瘤率为55.94%，F组抑瘤率为67.70%。见表3。
3评论
卵巢癌是女人生殖器官疾病中比较常见的肿瘤，据计算其发病率位居第3位。但因卵巢癌致死者却占首位，严重威胁妇女的生命。手术难以治好，一般需求化疗来连续医治。联合化疗一般以铂类为主，在大都卵巢癌中起显着效果，但因长时刻的副效果，如骨髓按捺、患者耐药、停药后复发等，使许多患者无法承受。激素代替疗法能够人为地弥补外源性雌激素，体内激素水平得以改进，许多卵巢癌手术后的更年期综合征症状得以改进。正常卵巢安排、卵巢良性肿瘤及卵巢恶性肿瘤安排中均有雌激素受体存在[3]。17β-雌二醇可于胎盘、卵巢等中提取。17β-雌二醇也用于生物试验，其搅扰未老练的或现已切除卵巢的大鼠阴道排泄物，显微镜下阴道排泄物出现由角化细胞组成。国外学者[4]在试验中初次发现ERβ，提出本来的ER界说为ERα，其在卵巢恶性肿瘤中出现高表达，而ERβ首要在良性肿瘤及人的正常上皮细胞中出现高表达。在上皮性卵巢癌中较正常卵巢，ERα呈上升趋势，ERβ呈下降趋势[5]，在浆液性和黏液性卵巢癌中ER出现高表达，所以，卵巢癌患者承受激素代替辅佐医治是否有用果，以及在激素代替医治效果下机体内是否发作一些生物化学反响等一系列问题需要研讨。
为讨论卵巢癌患者术后运用激素代替是否复发及对患者生计的影响，有文献[6]随机在373例患者中选取78例患者选用激素代替医治，定论是在卵巢癌的复发率及日子质量等方面，运用激素代替与未运用激素代替者比较无计算学差异。美国医学会杂志于2002年注销的根底干涉研讨中，其定论关于运用激素医治有很大的影响力[7]。研讨报导中妇女绝经后运用雌激素/孕激素，两者运用使血脂谱发作显着改动[8]。成果发现，运用雌激素后妇女骨折的风险削减，而深静脉血栓、脑血栓患病率添加，此定论与雌孕联合运用组共同。与对照组比较，在直肠癌、冠心病、结肠癌、乳腺癌中独自运用雌激素，雌激素的风险方面没有显着计算学含义[9]。相关文献[10]挑选绝经前后134例卵巢癌患者，在手术后8周分为两组，进行前瞻性随机对照剖析研讨，其意图是研讨雌激素是否影响卵巢癌的复发，以及对患者的生计质量是否有影响。卵巢癌患者一组承受安慰剂医治，另一组承受结合性雌激素医治，每日0.625 mg，成果标明62例激素代替患者中计算出59例，其间卵巢癌复发32例（54%）。卵巢癌复发后总生计期为35个月，不影响日子质量的生计时刻2年左右。总生计期与不影响日子质量的生计时刻无显着差异。定论标明激素代替医治不会搅扰患者的生计质量。
17β-E2首要是由卵巢排泄发作的一种性激素，保持外阴、阴道、子宫、输卵管的生理效果，促进这些器官的成长和发育老练。在临床中，雌激素作为药物，可用于防备骨质疏松、冠心病、老年痴呆症等老年病，首要用于医治围绝经期及更年期综合征。人们现已关注到17β-E2促进肿瘤成长、导致肿瘤构成等潜在的副效果。在1998年进行的一项前瞻性研讨，其成果是：患者运用雌激素10年以上者，发作卵巢癌的风险添加1/4。可是6项研讨中，激素代替医治10年者仅有1项研讨发现卵巢癌发作风险显着添加。总归，卵巢癌发作风险添加1/4，差异无计算学显着性，因而能够以为卵巢癌的发作与雌激素运用无关。关于雌激素在人体内的影响一向存在争辩。一些人以为雌激素在晚期前列腺癌、乳腺癌中运用有用[11]。故有必要在此方面加强研讨，有用使用雌激素的效果，在临床医治中得以运用，削减和防止不良的副反响发作。有研讨[12，13]对人卵巢癌细胞株OVCAR-3进行体外培育，研讨17β-E2对其是否有增殖或按捺效果，定论是生理浓度下17β-E2下降细胞增殖，加快细胞凋亡。可是现在关于17β-E2对人卵巢癌的试验研讨相对较少。
此试验中构建裸鼠移植瘤模型是要害。裸鼠移植瘤模型的影响要素，包含以下几点：（1）裸鼠：SPF等级，无菌环境下成长，了解裸鼠的日子习性，食物、水等均要到达规范。（2）卵巢癌细胞数量：构成裸鼠移植瘤，细胞数量至少为1×106个，最好细胞数量到达5×106个，成瘤率才高。瘤细胞量过低，不易于成瘤，少于1×105个仅使单个裸鼠成瘤[14]。因而在本试验中，接种正处于对数成长时刻的卵巢癌细胞，接种在裸鼠后背部皮下，每只0.2 mL，接种的卵巢癌细胞数量为4×107个细胞，接种后可见裸鼠后背部均有结节状突起，裸鼠移植瘤成瘤率100%，伴随着试验研讨，瘤安排逐步增大。（3）17β-E2用量：根据人和动物等效剂量换算法[15]，人每天用量×2.6×10-3=裸鼠每天用量，以及17β-E2临床用药剂量为1.5 mg/d、0.5 mg/d。因而核算出医治组中每只裸鼠接种17β-E2剂量为0.0039 mg/d、0.0013 mg/d。A组中每天给予打针生理盐水0.2 mL。晚上裸鼠的雌激素水平最高，因而每天19点准时在裸鼠身上打针药物。
本试验经过成功构建卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型，于裸鼠移植瘤上打针不同药物，比较医治前后裸鼠的体重、移植瘤的瘤体积、瘤重及抑瘤率。试验后发现各组裸鼠体重均有添加，各用药组医治后裸鼠体重均比A组体重轻，但各组无计算学含义。各医治组移植瘤体积均减小，各医治组间瘤重均有显着削减，其间低劑量17β-E2+DDP、高剂量17β-E2+DDP医治后比独自用药体积改动显着，两组比较较，高剂量17β-E2+DDP移植瘤体积、瘤重均更小。因而得出定论，各医治组与A组比较，均有按捺卵巢癌移植瘤成长的效果，并且高剂量17β-E2抑瘤效果更显着。17β-E2联合顺铂抑瘤效果优于独自用药，其间高剂量17β-E2 联合DDP抑瘤效果最显着。本研讨成果标明不同剂量17β-E2单用能按捺移植瘤成长，高剂量17β-E2联合顺铂更能有用按捺移植瘤的成长。因而，17β-E2联合顺铂对卵巢癌的临床医治有指导含义。
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（收稿日期：2017-02-20）
