齐青松++++++刘志华+++徐建明++++++钟培星++++++章小东
[摘要] 意图 剖析HBeAg阳性缓慢乙型肝炎患者外周血T淋巴细胞CD28表达特色。 办法 收集健康人、HBeAg阳性乙肝病毒带着者、HBeAg阳性缓慢乙型肝炎患者的外周血，抗体符号，选用流式细胞技能检测CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD4+CD28+T细胞、CD8+CD28+T淋巴细胞，一起检测肝功用、HBVDNA。 成果 缓慢乙型肝炎组、乙肝病毒带着组CD4+CD28+T细胞、CD8+CD28+T细胞、CD28+T细胞显着低于健康对照组（P<0.05）；高病毒载量组（HBVDNA≥107组）CD8+CD28+T细胞低于低病毒载量组（HBVDNA<107组）（P<0.05）。定论 一切成果显现乙型肝炎病毒继续感染状况与CD8+T细胞上共影响分子CD28的表达低下有关， 而CD8+T细胞上CD28的低表达与高病毒载量有关。
[关键词] 乙型肝炎；T淋巴细胞；CD28
[中图分类号] R512.6+2 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2014）09-0018-04
HBV感染后的转归依赖于人体免疫状况及其免疫应对，强有力的免疫反响针对病毒多种抗原发生特异性抗体终究铲除病毒，而低下的免疫反响不只不能操控病毒仿制并且导致继续感染和疾病发展。CD8+T细胞作为首要效应细胞，在病毒铲除中起重要作用[1，2]。而T细胞正常激活需求共影响信号，CD28是T细胞上重要的共影响分子，CD28对T细胞活化起关键作用[3]。虽然多种医治的施行包含抗病毒药物的运用，终究可以铲除病毒的缓慢乙型肝炎病例较少，因此笔者剖析缓慢乙型肝炎患者外周血CD28分子在T淋巴细胞表达状况、并将乙肝感染者与健康人群比较、评论乙肝感染缓慢化的原因。
1 目标与办法
1.1研讨目标
研讨目标来自2012年7月～2013年8月广东医学院隶属东莞市厚街医院传染科门诊及住院病区患者以及本院员工，从契合抗病毒规范[4]的HBeAg阳性缓慢乙型肝炎患者中，知情赞同后，抽取22例患者预备承受抗病毒医治为A组，其间男13例，女9例，年纪21～45岁，均匀（29.59±7.35）岁；另抽取21例HBeAg阳性缓慢乙肝病毒带着者为B组，其间男13例，女8例，年纪20～45岁，均匀（31.33±7.81）岁；本院HBsAg阴性的健康员工中抽取20例为C组，其间男12例，女8例，年纪21～42岁，均匀（31.15±5.04）岁。扫除规范：①6个月内运用过抗乙肝病毒、免疫抑制剂等药物；②一起感染甲型肝炎、丙型肝炎、丁型肝炎、戊型肝炎、HIV；③伴有其他体系严峻疾病（恶性肿瘤、严峻心脏病、糖尿病等）或免疫性疾病。
1.2 研讨办法
1.2.1 首要试剂仪器 Anti-Human CD3 PE-Cy7、Anti-Human CD4 FITC、Anti-Human CD8 APC、Anti-Human CD28 PE购自美国ebioscience公司，BD-FACSCalibur II流式细胞剖析仪。
1.2.2 细胞染色流式细胞仪检测剖析 EDTA抗凝管抽取静脉3 mL，1500 rpm/min离心5 min后，3 mLD-Hanks液当心稀释沉积，再次1500 rpm/min离心20 min后，当心将白膜层细胞吸出。D-Hanks液洗刷一次后，参加Anti-Human CD3 PE-Cy7、Anti-Human CD4 FITC、Anti-Human CD8 APC、Anti-Human CD28 PE抗体室温避光染色30min，然后2%小牛血清PBS洗刷2次后，BD-FACSCaliburⅡ流式细胞剖析仪进行检测并进行成果剖析。
1.2.3 HBVDNA、肝功用、乙肝六项、甲丙丁戊肝抗体、HIV抗体检测 HBV-DNA定量检测选用ABI7000检测仪，乙肝六项、甲丙丁戊肝抗体、HIV抗体检测选用ELISA办法进行，肝功用运用贝克曼DXC800自动化剖析仪。
1.3统计学处理
运用SPSS13.0软件进行统计学剖析，各组规范化的样本数值用（x±s）标明，两组间比较选用t 查验，多组间比较选用单因素方差剖析，P<0.05标明差异有统计学含义。
2 成果
一切检测数值为各T细胞亚群占CD3+T细胞百分比核算，CD3+T细胞代表总T淋巴细胞。
2.1 三组T细胞亚群比较
将A组（缓慢乙型肝炎组）、B组（乙肝病毒带着组）、C组（健康对照组）年纪进行比较，差异无统计学含义（P>0.05）。见表1。
2.2相关目标比较
A组、B组CD4+T细胞百分率、CD4+T细胞/CD8+T细胞比值低于C组，差异有统计学含义（P<0.05），A组、B组CD8+T细胞百分率高于健康对照组，差异无统计学含义（P>0.05）；见表1。A组、B组CD28+T细胞、CD4+CD28+T细胞、CD8+CD28+T细胞百分率低于C组，差异有统计学含义（P<0.05），而A组、B组之间CD4+CD28+T细胞、CD8+CD28+T细胞百分率差异无统计学含义（P>0.05）。见表1。
2.3 不同病毒载量患者T细胞亚群比较
笔者按病毒载量HBVDNA≥107、HBVDNA<107分组比较，高仿制组CD4+CD28+T细胞百分率低于低仿制组，差异无统计学含义（P>0.05）；高仿制组CD28+T细胞、CD8+CD28+T细胞百分率低于低仿制组，差异有统计学含义（P<0.05）。见表2。
2.4 慢乙肝患者及健康人外周血T淋巴细胞亚群上CP28分子表达
以单个缓慢乙型肝炎患者、乙肝带着者、健康人为例，选用流式细胞仪剖析外周血CD4+T细胞、CD8+T细胞亚群以及各亚群CD28分子表达状况。见图1～3。
3 评论
乙肝病毒感染发病与铲除机制没有彻底澄清，普遍认为与感染者免疫状况有关，CD4+T细胞为辅助性T细胞，CD8+T细胞是铲除病原体的首要效应细胞，其间CTL（cytotoxix T lymphocyte，细胞毒性T淋巴细胞）在操控感染及铲除病原体过程中起着关键作用[5、6]，CD8+CD28+T细胞就是CTL。
T细胞功用正常是以活化为条件的，它的激活有必要经过双信号， 第一信号经过T细胞抗原受体辨认并结合抗原递呈细胞外表的MHC（major histocompatibility complex，首要组织相容性复合体）-抗原肽发生，第二信号经过T细胞上CD28与抗原递呈细胞上的B7分子结合发生[7]。近10余年，许多新的共影响通路和共影响分子被发现，双信号理论也得到不断完善，传统的CD28/B7通路仍然是最首要的共影响通路，因此笔者对缓慢乙型肝炎患者外周血T细胞上CD28表达状况进行研讨。
本研讨选取22例HBeAg阳性缓慢乙型肝炎患者和21例乙肝病毒带着者，并挑选20例本院健康员工为对照组，因为CD28表达跟着年纪的增加而逐渐下调[8]，笔者对三组年纪进行比较，差异无统计学含义，因此具有可比性。研讨成果显现：①缓慢乙型肝炎组、乙肝病毒带着组CD4+CD28+T细胞显着低于健康对照组，差异有统计学含义，与Arasli[9]、范振平[10]报导共同。有研讨标明，CD4+T细胞对CD8+T细胞的增殖与活化具有重要调节作用[11]，CD4+T细胞本身相同需求活化，CD4+CD28+T细胞削减标明能被活化的CD4+T细胞削减，因此CD4+T细胞的调节作用受影响，必定在必定程度上影响到CD8+T细胞的增殖与活化。②缓慢乙型肝炎组、乙肝病毒带着组CD8+CD28+T细胞低于健康对照组，差异有统计学含义，与范振平[10]、王沂芹[12]报导成果共同。因此，以上成果标明乙肝感染者CD4+CD28+T细胞、CD8+CD28+T细胞削减与乙肝感染继续状况有相关性。③缓慢乙型肝炎组、乙肝病毒带着组CD4+CD28+T细胞、CD8+CD28+T细胞之间差异无统计学含义。理论上，缓慢乙型肝炎处于免疫激活状况，乙肝病毒携处于免疫耐受状况，他们之间应该存在差异，本研讨成果可能与样本含量有关，需求扩展样本量。不过，无论是缓慢肝炎仍是乙肝病毒带着者，终究能铲除病毒的份额很少，显现两者免疫状况没有本质上的差异，可能是免疫耐受程度稍有差异。
别的，笔者将研讨目标依照病毒载量凹凸分为HBVDNA≥107、HBVDNA<107两组，成果病毒载量越高，CD8+CD28+T细胞百分率越低，而CD4+CD28+T细胞百分率并不受HBV病毒载量的影响，提示HBV高仿制与CD8+T细胞的CD28分子的低表达有相关性。不过，并非只要HBV感染呈现CD8+T细胞上CD28分子的表达低下，HIV、EBV等病毒[13、14]也呈现相同体现，结合现在试验成果，笔者估测，HBV特异性CTL长时间暴露在很多抗原影响，可能导致CD8+CD28+T细胞耗费性削减，因此体现为乙肝感染者CD8+T细胞上CD28分子的表达下调。可是，最近有研讨发现[15]缓慢乙型肝炎患者外周血游离CD28较健康人增多，结合缓慢乙型肝炎患者CD8+CD28+T细胞削减这一现象是否暗示着：CD8+CD28+T细胞削减别的一个原因可能是CD8+CD28+T细胞上CD28+分子与之解离导致？这还需求进一步证明。
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