雷国华 刘建军 李尊波
[摘要] 重症肌无力是抗体介导、累及神经-肌肉接头的获得性本身免疫性疾病，除了常见的乙酰胆碱受体抗体及肌肉特异性酪氨酸激酶抗体外，重症肌无力还存在其他临床罕见抗体；经过对重症肌无力中呈现的多种相关抗体及检测办法剖析，进步对该疾病的进一步知道。
[关键词] 重症肌无力；衔接素抗体；兰尼碱受体抗体；放射免疫法；荧光细胞染色办法
[中图分类号] R746.1 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2018）05-0165-04
[Abstract] Myasthenia gravis is an antibody-mediated acquired autoimmune disease， which involves in neuromuscular junctions. In addition to common acetylcholine receptor antibodies and muscle-specific tyrosine kinase antibodies， there are other clinically rare antibodies of myasthenia gravis. Through the analysis of a variety of myasthenia gravis related antibodies and detection methods， further understanding of the disease is improved.
[Key words] Myasthenia gravis； Catenin antibody； Raney-base receptor antibody； Radioimmunoassay； Fluorescent cell staining
重癥肌无力（myasthenia gravis，MG）首要是由乙酰胆碱受体抗体（acetylcholine receptor antibody，AChR-Ab） 介导、累及神经-肌肉接头的获得性本身免疫性疾病。全身型MG患者中约80%可检测出AChR-Ab，仅有缺乏10%的MG患者肌肉特异性酪氨酸激酶抗体（muscle-specific tyrosine kinase，MuSK）阳性[1]，可是，仍有小部分MG患者血清AChR-Ab和MuSK-Ab均呈阴性，这部分MG被称之为血清双阴性重症肌无力[2]。跟着检测办法的不断进步，血清双阴性MG患者中发现了多种MG相关抗体，现首要对MG临床罕见抗体及检测办法进行总结，进步对该疾病的进一步知道。
1 MG相关抗体
1.1 常见抗体
20世纪70年代Lindstrom等[3]在85%MG患者的血清中检测到AChR-Ab，然后确立了MG在B细胞介导的本身免疫性疾病中的位置。2001年Hoch W等[4]在70%AChR-Ab阴性MG患者的血清中发现了MuSK-Ab。AChR-Ab首要有IgG1和IgG3亚类，其经过补体介导的突触后膜危害，受体胞吞以及AChR阻滞效果发作严峻的AChR丢失[5]，MuSK-Ab为IgG4亚类，其不激活弥补，首要是与低密度脂蛋白受体相关蛋白4（low-density lipoprotein receptor-related protein 4，LRP4）相互效果，然后按捺蛋白依赖性的AChR聚簇[6]。LRP4 又被称为多表皮生长因子样域7（multiple epidermal growth factor-like domains 7，MEGF7），2011年，Higuchi O等[7]初次在dSN-MG患者血清中检测出了LRP4-Ab，LRP4-Ab归于IgG，曩昔一向以为LRP4 与脂质代谢、肢体发育等有关[8]。近年来研讨发现，其经过按捺神经元开释的Agrin与胞外LRP4的结合，使得Agrin-LRP4-MuSK信号传导通路损坏而致病[9]。可是，MG发病中，AChR-Ab危害突触后膜，PsmR-Ab经过按捺突触前膜慢K+通道，使得突触前膜的动作电位时程延伸，导致乙酰胆碱囊泡搬迁及开释改动，然后影响肌纤维振奋缩短的发作，终究导致信号开释阶段的妨碍。
1.2 柠檬酸提取物相关抗体（CAE-Ab）和衔接素抗体（Titin-Ab）
60年代初人们运用免疫荧光技能发现在MG患者血清中含有与骨骼肌横纹肌切片穿插上色的一种本身抗体，这以后证明了胸腺的肌样细胞与该抗体反响[10]。柠檬酸提取物相关抗体（citric acid extract antibody，CAE-Ab），存在于胸腺、骨胳肌及心肌。1981年，Aarli JA等[11]在胸腺瘤MG患者的血清样品发现能与MG患者发作反响的骨骼肌柠檬酸提取物抗原成分为Titin蛋白，该蛋白又称衔接素，是骨骼肌和心肌中除粗细肌原纤维之外的第3种结构蛋白，该蛋白长约1 μm，由27000个氨基酸组成。Titin蛋白特别的摆放办法可增强肌节的安稳性、停止张力。随后，Gautel M等[12]证明Titin蛋白的首要免疫原性区域被称为titin-30，坐落A/I带接壤区，另一个免疫原性区域坐落N1和N2之间。近年来，衔接素抗体（titin antibody，Titin-Ab）被以为是MGT患者血清中重要的本身抗体之一。MG与胸腺功用紊乱之间存在相互关系，约75%MG患者存在不同程度的胸腺反常[13]。CAE-Ab多见于MGT，黄载慧等[14]运用ELISA办法检测CEA-Ab及Titin-Ab两种抗体确诊MGT，成果显现关于确诊同一病理类型MGT敏感性及同一种Osserman分型抗体阳性检出率无显着差异。武茜等[15]研讨发现CAE-Ab对MGT发病具有明显相关性，前纵隔肿瘤患者术前检测CAE-Ab结合CT查看，可进步确诊胸腺疾病的敏感性。
1.3 二氢吡啶受体抗体（DHPR-Ab）与兰尼碱受体抗体（RYR-Ab）
二氢吡啶受体（dihydropyridine receptor，DHPR）是细胞膜上的L型电压门控钙离子通道和电压感受器，骨骼肌、心肌中含量较高。Maruta T等[16]研讨了MG患者与振奋-缩短（excitation-contraction coupling，E-C）偶联有关的本身抗体，在37%的胸腺瘤MG患者中检测到DHPR-Ab。兰尼碱受体（ryanodine receptor，RyR）是坐落肌质网中的钙通道蛋白，因能和一种植物碱Ryanodine结合而命名，其有骨骼肌（RyR1）和心肌（RyR2）两种方式，MG患者的RyR-Ab与两者均可反响。RyR是由4个同源亚基组成四聚体，是一种含有5035个氨基酸，分子量为565 kDa的蛋白质，RyR首要在横纹肌安排中表达，上皮安排和神经元中也可呈现。肌膜去极化电位经过T管抵达肌质网的终端池，诱导RyR的构象变化，使钙内流，然后触发骨骼肌细胞缩短[17]。RyR-Ab可削弱这种效果，可能是因为胸腺的部分RyR与之发作反响然后使T细胞致敏，进一步影响B细胞发作RyR-Ab，骨骼肌不能有用缩短而导致肌无力。有研讨显现[18]骨骼肌中DHPR和RyR的信号转导为双向的，两者之间机械和化学的双向偶联机制是E-C的根底。除神经肌肉的传导反常，MG与肌肉的振奋缩短偶联受损相关，DHPR-Ab是伴胸腺瘤的MG的又一个新标志，可能与肌肉的振奋缩短耦联有关。
1.4 电压门控性钾通道抗体（Kv-Ab）
Kv抗体常见的有Kvl.1、Kvl.2或Kvl.6，而抗Kvl.4抗体首要存在于骨骼肌、心肌及脑中。Suzuki S等[19]在2005年运用兔耳肌细胞提取物作为抗原来历，S35符号的横纹肌肉瘤细胞中发现Kvl.4抗体，924例MG患者中发现8例（男1例，女7例）发展为炎症性肌病，但存在非肌炎特异的本身抗体，其间3例患者发现抗Kvl.4抗体。MG相关的炎症性肌病的临床和免疫学特征与多发性肌炎不同，首要，心肌劳累和胸腺瘤在多发性肌炎中并不常见[20]。其次，MG患者相关的炎症性肌病的本身抗体与多发性肌炎患者中的肌炎特异性本身抗不同[21]。Kvl.4抗体阳性的MG患者易发作延髓型肌无力、胸腺瘤及心肌炎。现在关于Kvl.4抗体的MG的报导较少，其在MG发病机制中的效果需要进一步讨论。
1.5其他更罕见抗体
MG还可呈现胶原蛋白XIII抗体、聚蛋白抗体、DHPR-Ab、抗补体C5-Ab、HSP70-65-Ab、IFN抗体[22]等临床罕见抗体。值得注意的是：①IFN抗体在MG伴胸腺瘤患者外周血中水平较高，IFN具有抗肿瘤效果，而且具有多生物学效应，首要由白细胞、成纤维细胞发作的一种细胞因子[23]。②胶原蛋白是称为MACITs（具有连续的三螺旋的膜相关的胶原蛋白）的胶原亚组的成员，由短的胞质结构域、单个跨膜结构域和大部分的胶原胞外域组成[24]。胶原蛋白是神经肌肉接头老练所需的跨膜蛋白。最近的研讨标明胶原蛋白坐落神经肌肉接头的功用区，结合乙酰胆碱酯酶相关胶原蛋白（ColQ），并有助于神经肌肉接头的乙酰胆碱酯酶的散布方式。因而，咱们估测胶原蛋白本身抗体的致病机制可能是阻止胶原蛋白和其他突触基底层组分之间的相互效果，并使神经肌肉接头突触不安稳[25]。
2 检测办法
2.1 放射免疫法（radioimmunoprecipiation assay：RIA）
RIA又叫做竞赛性饱满法，抗原和抗体由放射性物质符号，随之结合待检样本，构成抗原抗体复合物进行测定。以往的放射免疫测定办法关键在于竞赛结合特异性抗体，竞赛双方为放射性符号的抗原与待检样本中未符号的抗原；另一种办法是在前者的根底上扩展，关键在于放射性物质符号足量抗体，结合待检抗原，运用固相免疫吸附载体的原理的一种非竞赛放射免疫剖析法。RIA优势在于特异性强、灵敏度高、可一次完结很多样本的检测、血清的消耗量少。国外研讨多选用敏感度和特异度均高的RIA检测AChR-Ab的滴度[26]，尤其是相似MG症状的开始挑选时，RIA运用更广泛。
2.2 酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）
ELISA法其本质是一种特异性化学发光反响，优势在于该办法运用高度特异性抗原抗体结合，能够有用消除样本的本底和对位量搅扰，得到更高的灵敏度。现在，ELISA法可完成全自动化，減少了体系及随机误差，因而广泛运用于MG抗体检测中。可是，该法易受多方面要素的搅扰：①代谢物，测定易呈现穿插反响，搅扰生物使费用；②抗体的构成，对蛋白的定量测定发作影响；③基质特异性，蛋白的反响性易改动。因而，国内外多引荐运用特异度和灵敏度均高的RIA检测抗体及其滴度。
2.3 荧光细胞染色办法（cell-based assays，CBA）
CBA原理在于经过编码蛋白的互补DNA（cDNA）转染活的人胚胎肾（HEK）细胞，一起与细胞内锚定蛋白rapsyn一起表达，然后使得AChR在HEK细胞外表上表达。测定AChR-Ab时，可用AChR亚基的cDNAs以及rapsyn增强的绿色荧光蛋白转染HEK细胞。测定LRP4-Ab时，用LRP的cDNAs转染HEK细胞来增强细胞外表表达。CBA的优势在于可检测生物膜环境中的AChR结合的抗体，这些抗体具有天然构象状况和恰当的糖基化水平，与神经肌肉接头处的抗体相似。因而，CBA可进步血清阴性MG患者的抗体检测的阳性率。CBA高敏感性很可能是因为其检测到的抗体经过二价结合使细胞外表上的AChR簇交联效果，然后增加了CBA检测抗体的敏感性。可是CBA的下风在于，它需运用活细胞，需安排培养设备，本钱高，耗时长，现在首要运用于专门的研讨中心[27]。
2.4 時间分辩荧光免疫剖析法（time-resolved fluoroimmunoassay，TRFIA）
MG患者中AChR-Ab可经过放射免疫沉淀测定，为研讨一种非放射性免疫测定法，人们建立了一种镧系元素的高灵敏度检测，可符号多种化合物。TRFIA运用Eu3+-a-CTx而不是125I-a-BuTx符号的抗原[28]。其优势在于用于符号抗原的试剂是比125 I-a-BuTx更安稳，克服了酶不安稳性及RIA中放射性同位素的污染问题，可是，要求专业的试验设备，约束了该办法的广泛运用。
MG是临床罕见疾病，同其他本身免疫疾病相同，其发病的分子机制扑朔迷离，本身抗体与MG的发病机制密不可分，已发现MG相关抗体十余种，是否还存在与MG相关的抗体仍在探究，现在存在许多问题需进一步处理，如本身抗体之间的信号转导是怎么发动和调理本身免疫应对等，跟着关于MG的深入研讨将会有更新的发展；国内外多引荐运用特异度和灵敏度均高的RIA检测抗体及其滴度，进步检测抗体的准确性以及扩展检测办法，然后更好地去知道MG这一疾病。
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（收稿日期：2017-12-21）
