张敏
[摘要]意图 评论普伐他汀对人胰腺癌细胞SW1990的效果及其联合顺铂对该细胞增殖的影响。办法 选用MTT比色法检测普伐他汀对SW1990细胞成长的按捺效果，选用流式细胞仪测定细胞的周期散布和凋亡率。顺铂、普伐他汀联合顺铂效果细胞48 h后，选用MTT法测定各处理组的OD值，并核算相互效果指数（CI）。成果 1、5、10、15、25 μmol/L普伐他汀效果于SW1990细胞24～72 h，跟着药物浓度添加和效果时刻延伸，处理组OD值不同程度下降（P<0.05），成长按捺率逐步增大。0、5、15、25 μmol/L普伐他汀处理细胞48 h后，G0/G1期细胞逐步增多，S期和G2/M期细胞逐步削减，凋亡率由（2.74±0.92）%添加至（27.85±1.56）%。普伐他汀联合顺铂效果细胞后，两者的CI值均<1。定论 普伐他汀具有按捺胰腺癌细胞SW1990增殖和诱导该细胞凋亡的效果，并可阻滞细胞周期于G1期。普伐他汀联合顺铂对SW1990细胞具有协同抗瘤效果。
[关键词]普伐他汀；顺铂；胰腺癌；增殖；凋亡；SW1990
[中图分类号] R735.9 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2016）11（a）-0004-04
Influence of Pravastatin on human pancreatic cancer cell SW1990 and its synergistic antitumor effects with Cisplatin
ZHANG Min
Department of Internal Medicine-Oncology，People′s Hospital of Xingtai City in Hebei Province，Xingtai 054001，China
[Abstract]Objective To study the effects of Pravastatin on human pancreatic cancer cell SW1990 and the influence of combining Pravastatin and Cisplatin on the cells proliferation.Methods Inhibition of Pravastatin on SW1990 cells was measured by MTT colorimetric method，apoptosis rate and distribution of cell cycle were shown by flow cytometry.After the cells were treated with cisplatin，combining Pravastatin with Cisplatin for 48 hours，Proliferation was examined with MTT test，the OD values were computed，the combination index （CI） was calculated.Results SW1990 cells were treated with 1，5，10，15，25 μmol/L Pravastatin for 24 hours to 72 hours，with the increase of drug concentration and the prolongation of time，different levels of OD value in each treatment group decreased （P<0.05），the growth inhibition rate increased gradually.After the cells were treated with 0，5，15，25 μmol/L Pravastatin for 48 hours，the number of cells in G0/G1 phase increased gradually，while the number of cells in S phase and G2/M phase decreased gradually，and the apoptosis rate increased from （2.74±0.92）% to （27.85±1.56）%.The CI values of Cisplatin and Pravastatin were all less than 1 when the cells were treated with two drugs.Conclusion Pravastatin can inhibit the proliferation and induce the apoptosis of SW1990 cells in vitro，and show an arrest of cell cycle in G1 phase.Combining Pravastatin with Cisplatin show a synergistic antitumor effect on SW1990 cells.
[Key words]Pravastatin；Cisplatin；Pancreatic cancer；Proliferation；Apoptosis；SW1990
胰腺癌預后差，在西方国家居恶性肿瘤逝世第4位，估计在未来十年内将上升至第2位[1]。在我国，胰腺癌坐落恶性肿瘤逝世第9位。他汀类药物是20世纪80年代研制的一类调脂药物，可下降细胞内胆固醇生成。研讨标明，他汀类药物除了具有下降胆固醇的效果外，还具有抗肿瘤效果。本研讨旨在评论普伐他汀对人胰腺癌细胞SW1990的影响及其联合顺铂的抗瘤效果。
1材料与办法
1.1首要材料
人胰腺癌细胞株SW1990由河北医科大学第四医院科研中心惠赠；普伐他汀购自美国Sigma公司；胎牛血清为杭州四季青生物技术公司产品；四甲基偶氮唑蓝（MTT）、二甲基亚砜（DMSO）均购自美国Sigma公司；顺铂为市售齐鲁制药公司产品。
1.2细胞培育
在37℃、饱和湿度、5%CO2的培育箱内，将SW1990细胞置于含10%胎牛血清、含青霉素100 U/ml、含链霉素100 U/ml的RPMI-1640培育基中惯例传代培育。
1.3试验办法
1.3.1 MTT比色法检测细胞增殖 将对数成长期细胞接种于96孔板，用含不同浓度普伐他汀的RPMI-1640培育基换液培育24、48、72 h。试验设空白对照组（空白培育基）、细胞对照组（不含普伐他汀）以及含1、5、10、15、25 μmol/L普伐他汀的处理组，每组设6个平行孔。培育完成后参加MTT液，持续培育4 h弃上清，上机于波长570 nm处测定吸光度（OD）值，并依据OD值核算细胞成长按捺率。成长按捺率（%）=（细胞对照组OD值-处理组OD值）/（细胞对照组OD值-空白对照组OD值）×100%。
1.3.2流式细胞仪检测细胞周期散布和凋亡率 将对数成长期细胞接种于培育瓶中，参加0、5、15、25 μmol/L的普伐他汀处理48 h后收成细胞，选用流式细胞仪对细胞进行DNA剖析，核算细胞周期的时相散布和凋亡率。
1.3.3 MTT比色法檢测普伐他汀联合顺铂对SW1990细胞的影响 将对数成长期的细胞制成单细胞悬液，接种于96孔板上。细胞贴壁成长后，参加含不同组别、不同浓度药物的培育基持续培育48 h，搜集细胞，上机测OD值并核算不同组别细胞成长按捺率。试验分组：空白对照组，细胞对照组，浓度为0.1、0.5、1.0 μg/ml单药顺铂组，浓度为1、5、10 μmol/L普伐他汀别离联合0.1、0.5、1.0 μg/ml顺铂组。
核算普伐他汀和顺铂的相互效果指数（combination index，CI），CI值=普伐他汀a/普伐他汀b+顺铂a/顺铂b，其间，普伐他汀a、顺铂a为两药联合到达某一成长按捺率时各自的浓度，普伐他汀b、顺铂b为两药独自使用到达相同成长按捺率时的各自的浓度。CI>1.0标明两药联合具有拮抗效果，CI=1.0标明两药联合具有相加效果或无关效果，CI<1.0标明两药联合具有协同效果。
1.4计算学处理
选用SPSS 17.0计算软件对数据进行剖析，计量材料用x±s表明，多组间比较选用单因素方差剖析，组间比较选用LSD-t查验，以P<0.05为差异有计算学含义。
2成果
2.1普伐他汀对SW1990细胞成长按捺率的影响
1、5、10、15、25 μmol/L普伐他汀处理细胞24～72 h，跟着药物浓度的添加和效果时刻延伸，各处理组OD值不同程度下降（P<0.05），成长按捺率逐步增高（图1）。
2.2普伐他汀对SW1990细胞周期散布的影响
5、15、25 μmol/L普伐他汀效果SW1990细胞48 h后，和对照组比较，随药物浓度增大，G0/G1细胞逐步增多，S期和G2/M期细胞逐步削减（图2）。
2.3普伐他汀对SW1990细胞凋亡的影响
SW1990细胞经过不同浓度普伐他汀处理48 h后，空白对照组（0 μmol/L普伐他汀）的凋亡率为（2.74±0.92）%，5 μmol/L普伐他汀处理组的凋亡率为（7.34±1.23）%，15 μmol/L普伐他汀处理组的凋亡率为（15.76±2.18）%，25 μmol/L普伐他汀处理组的凋亡率为（27.85±1.56）%。各组的凋亡率比较，差异有计算学含义（F=800.971，P<0.05）。5 μmol/L普伐他汀处理组的凋亡率高于空白对照组，差异有计算学含义（P<0.05）。15、25 μmol/L普伐他汀处理组的凋亡率明显高于空白对照组，差异有计算学含义（P<0.01）。
2.4普伐他汀联合顺铂对SW1990细胞增殖的影响
选用MTT比色法剖析普伐他汀联合顺铂对SW1990细胞增殖的效果，如表1所示。0.1、0.5、1.0 μg/ml顺铂效果于细胞后的OD值明显低于对照组（0 μmol/L普伐他汀+0 μg/ml顺铂），差异有计算学含义（F=311.139，P<0.05）。1、5、10 μmol/L普伐他汀别离配伍联合0.1、0.5、1.0 μg/ml顺铂，不同浓度普伐他汀联合某一浓度顺铂后，联合组的OD值明显低于该浓度单药顺铂组（0.1、0.5、1.0 μg/ml顺铂组，差异有计算学含义（F=404.575、383.930、88.359，均P<0.05）。
2.5普伐他汀联合顺铂对SW1990细胞成长按捺率的影响
依据公式核算出普伐他汀联合顺铂效果SW1990细胞后的成长按捺率并绘制成按捺率曲线（图3）。成果显现，普伐他汀联合顺铂到达细胞成长按捺率为50%时的CI值，普伐他汀联合顺铂的CI值均<1，提示普伐他汀和顺铂可协同按捺SW1990细胞增殖。
3评论
他汀类药物经过按捺HMG-CoA还原酶阻滞内源性胆固醇组成过程中的甲羟戊酸（mevalonic acid，MVA）途径，然后影响许多重要的生物学功用如细胞膜构成、蛋白异戊二烯化、细胞内信号转导、细胞周期进程等[2]。越来越多的研讨证明，他汀类药物对多种肿瘤细胞具有按捺增殖、诱导分解和凋亡、按捺重生血管、防备滋润搬运的效果[3-8]，且其对正常细胞没有明显毒副效果，具有杰出的抗肿瘤远景。本试验证明，普伐他汀对胰腺癌细胞SW1990具有按捺增殖、诱导凋亡的效果并能阻滞该细胞周期进程。
胰腺癌是消化系统常见的恶性肿瘤，发病藏匿，病况发展快，患者就诊时多已发作部分滋润或远处搬运，80%以上的患者已无法行彻底治愈性手术。胰腺癌致死率高，5年生存率仅为1%～4%，即便手术联合辅佐化疗，总生存率也≤30%[9-10]。近年来因为医治的发展，无法手术切除的部分晚期或搬运性胰腺癌患者的总生存期已延伸至将近1年[11]，但整体而言，胰腺癌患者手术治愈率低，对放疗不灵敏，缺少特异的靶点和高效的靶向药物[12-13]，新式的免疫医治尚不老练[14]，化疗仍是发展期或搬运性胰腺癌的首要医治手法。顺铂为现在临床最常用的化疗药物，抗瘤谱广，顺铂联合吉西他滨是医治胰腺癌常用的化疗计划之一。
近年来，许多体表里试验报导了他汀类药物的放化疗增敏效果。2012年的一项研讨证明，在前列腺癌PC-3细胞中，阿伐他汀增强了放疗的灵敏性[15]。Martirosyan等[16]指出，洛伐他汀增强了阿霉素按捺卵巢癌细胞的效果。本试验成果显现，普伐他可增强顺铂的抑瘤效果。
综上所述，普伐他汀具有按捺胰腺癌细胞SW1990增殖和诱导该细胞凋亡的效果，并可阻滞细胞周期于G1期。普伐他汀联合顺铂对SW1990细胞具有协同抗瘤效果。
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（收稿日期：2016-10-08 本文編辑：祁海文）
