邹淑琴
[摘要]意图 對比剖析高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）的查验中聚阴离子多聚物/表面活性剂（PPD）法和PEG润饰酶/硫酸α-环糊精（PEGME）法及沉淀法的精确性和特异性。办法 分别将已知浓度为1.0～2.0、2.0～4.0 mmol/L的HDL-C、LDL-C在生化剖析仪上进行测验，运用两点终点法对参数进行剖析，主、辅波长分别为600、700 nm，在3 μl标本量中参加240 μl R1，288 s后读取吸光度A1，反响5 min后再将80 μl R2参加其间，600 s后读取吸光度A2。根据参阅品的HDL-C、LDL-C浓度值核算其含量。成果 PPD法试剂对HDL-C具有相对缓慢的效果，对LDL的非特异性反响较为显着，到达10%～20%；PEGME法试剂对HDL-C具有相对较快的效果，对LDL-C根本不具有非特异性反响，仅为5%以下。HDL-C、LDL-C、Trig的正常值分别为1.1～1.7、1.7～2.9、0.4～1.8 mmol/L，PPD法的成果高于沉淀法7%～15%。将参照设定为沉淀法成果，假如血清标本在正常胆红素浓度范围内，则PPD法测定成果就具有假性增高的体现，而假如血清标本胆红素浓度>20 μmol/L，则PPD法测定成果就具有显着下降的体现，到达参照值的60%；胆红素浓度改变很少搅扰PEGME法测定成果。将参照设定为沉淀法成果，PPD法测定成果遭到三酰甘油的影响显着提高了20%以上，而三酰甘油浓度的提高使其进一步假性增高；PEGME法较少遭到三酰甘油的影响。两者均与三酰甘油浓度成负性关系。PPD法的成果显着高于沉淀法（t=4.303，P<0.05）。定论 HDL-C的查验中PEGME法优于PPD法，临床实验室应慎重使用PPD法，值得临床注重。
[关键词]高密度值蛋白胆固醇；沉淀法；聚阴离子多聚物/表面活性剂法；PEG润饰酶/硫酸α-环糊精法
[中图分类号] R446.11+2 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2016）12（a）-0148-04
Comparative analysis of three test methods of high density protein cholesterol
ZOU Shu-qin
Clinical Laboratory，People′s Hospital of Fengshun County in Meizhou City，Guangdong Province，Fengshun 514300，China
[Abstract]Objective To compare and analyze the accuracy and specificity of polyanionic polymer/surfactant （PPD） method and PEG-modified enzyme/sulfate α-cyclodextrin method （PEGME） and precipitation method in high-density lipoprotein cholesterol （HDL-C） inspection.Methods The known concentration 1.0 to 2.0，2.0 to 4.0 mmol/L of HDL-C，LDL-C were tested on biochemical analyzer，the parameters were analyzed by two point end method，the primary and secondary wavelength were 600 nm，700 nm，respectively，240 μl R1 were joint to 3 μl sample，288 s absorbance A1 volume was readed out，the reaction for 5 min before the 80 μl R2 added，600 s absorbance A2 after reading it.values were calculated its content according to the reference product of HDL-C，LDL-C concentration.Results PPD reagent had relatively slow effect on HDL-C，nonspecific response to LDL-C was up to 10% to 20%；PEGME reagent had relatively high effect on HDL-C，the LDL-C did not have a nonspecific response， only 5%.The normal values of HDL-C，LDL-C and 1.1 to 1.7 mmol/L were respectively Trig，1.7 to 2.9，0.4 to 1.8，and the result of PPD method was higher than that of precipitation method 7% to 15%.The reference set for precipitation results，if the serum samples in normal bilirubin concentration range，so the test results of the PPD method with false increase performance，and if the serum bilirubin concentration of >20 mol/L，then PPD assay results had significantly lower performance，reached the reference value of 60%；the change of bilirubin concentration little interference PEGME determination results.The reference set for precipitation results，PPD determination results were influnced by the triglyceride，and was significantly improved more than 20%，while raising the concentration of triglyceride increased further pseudo PEGME method；less triglyceride effect.The two were negatively correlated with triglyceride concentration.The result of PPD method was significantly higher than that of precipitation method （t=4.303，P<0.05）.Conclusion The PEGME method is better than PPD method in HDL-C inspection， the clinical laboratory should prudent application of PPD method，so is worthy of the clinical′s attention.
[Key words]High density protein cholesterol；Precipitation method；PPD method；PEGME method
在临床连续遍及高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）直接测定法后，沉淀法现已开展成为临床选用的重要比较办法[1]。抗体包裹（IS）法是直接测定法的来源，优于临床很难制备该法的特异性抗体，一起该法具有较多的反响过程，因而只在一些特定类型的仪器上适用，在临床的使用中遭到了极大程度的约束[2]。现在，聚阴离子多聚物/表面活性剂（PPD）法和PEG润饰酶/硫酸α-环糊精（PEGME）法现已在临床得到了广泛使用，国内主要对PPD法进行了研讨[3]。近年来，一种消除法呈现，其对HDL-C没有非特异性反响，且具有较为特异而敏捷的效果，特别是三酰甘油水平不对其构成影响。其类似于低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）测定的消除法，可是依然需求相关医学学者对其试剂的确切性进行考证[4]。为了将有用根据提供给临床，本研讨比照剖析沉淀法、PPD法、PEGME法，现报导如下。
1材料与办法
1.1仪器和试剂
使用序列超离制备HDL-C、LDL-C，d分别为1.070～1.100、1.025～1.050 g/ml。购买BM公司出产的HDL-C/LDL-C校准血清（HDL-C、LDL-C分别为1.40、2.61 mmol/L），本中心自备沉淀法试剂，购买罗氏出产的PPD法、PEGME法试剂，详细见表1。
1.2办法
分别将已知浓度为1.0～2.0、2.0～4.0 mmol/L的HDL-C、LDL-C在生化剖析仪上进行测验，运用两点终点法对参数进行剖析，主、辅波长分别为600、700 nm，在3 μl标本量中参加240 μl R1，288 s后读取吸光度A1，反响5 min后再将80 μl R2参加其间，600 s后读取吸光度A2。根据参阅品的HDL-C、LDL-C浓度值将其含量核算出来。
1.3统计学剖析
选用SPSS 20.0统计学软件对数据进行剖析，计量材料以x±s标明，选用t查验，以P<0.05为差异有统计学含义。
2成果
2.1 PPD法、PEGME法试剂对HDL-C、LDL-C的效果状况
PPD法试剂对HDL-C具有相对缓慢的效果，对LDL-C的非特异性反响较为显着，到达了10%～20%；PEGME法试剂对HDL-C具有相对较快的效果，对LDL-C根本不具有非特异性反响，仅为5%以下。由于人体LDL-C浓度显着高于HDL-C，因而其成果具有较高的精确性。
2.2沉淀法、PPD法、PEGME法对正常血清标本HDL-C的测验成果
HDL-C、LDL-C、Trig的正常值分别为1.1～1.7、1.7～2.9、0.4～1.8 mmol/L，PPD法的成果高于沉淀法7%～15%，提高原由于PPD法对LDL-C具有非特异性反响；PEGME法和沉淀法成果较好地契合，见表2。
2.3 PPD法、PEGME法在不同胆红素浓度下所测HDL-C值和沉淀法测值的比较
将参照设定为沉淀法成果，若血清标本在正常胆红素浓度范围内，则PPD法测定成果就具有假性增高的体现，而假如血清标本胆红素浓度>20 μmol/L，则PPD法测定成果就具有显着下降的体现，到达参照值的60%；胆红素浓度改变很少搅扰PEGME法测定成果，见表3。
2.4 PPD法、PEGME法在不同三酰甘油浓度下所测HDL-C值和沉淀法测值的比较
将参照设定为沉淀法成果，PPD法测定成果遭到三酰甘油的影响显着提高了20%以上，而三酰甘油浓度的提高使其进一步假性增高；PEGME法较少遭到三酰甘油的影响，两者均与三酰甘油浓度成负性关系，见表4。
2.5 PPD法、PEGME法在契合HDL-C/LDL-C校准血清下所测HDL-C值和沉淀法测值的比较
PPD法的成果显着高于沉淀法，差异有统计学含义（t=4.303，P<0.05），增高原由于其对LDL-C具有非特异性反响；PEGME法和沉淀法成果具有较好的契合，见表5。
3评论
相关医学学者研讨标明[5]，PPD法缺少满足精确的试剂，高胆红素标本乃至会有42%的误差呈现。研讨标明[6]，PPD法具有较差的精确性和特异性，乃至以为PPD法应该在临床查验中慎用[7]，以为该法无法将反响酶系对LDL-C显着的副效果从根本上消除去，随时可能会发作假性增高或下降，因而，临床普遍以为[8]，在查验过程中应该慎用PPD法试剂。PEGME法具有较好的效果，可是三酰甘油會使其具有较低的成果[9]。本研讨成果标明，PPD法试剂对HDL-C具有相对缓慢的效果，对LDL-C的非特异性反响较为显着，到达10%～20%；PEGME法试剂对HDL-C具有相对较快的效果，对LDL-C根本不具有非特异性反响，仅为5%以下。由于人体LDL-C浓度显着高于HDL-C，因而其成果具有较高的精确性；PPD法与沉淀法比较具有较大的误差，成果具有较多的假性增高，发作这一现象的原由于其具有较差的精确性和特异性，详细体现在对HDL-C具有较弱的反响性，对LDL-C的非特异性反响显着，具有较差的抗胆红素和三酰甘油搅扰才干；PEGME法和沉淀法具有较好的契合，其具有较为优秀的抗搅扰功能、反响速度及选择性，因而具有较为抱负的效果，显着优于PPD法，在惯例剖析中较为适用，将两种测定办法的实质状况根本反映出来，与上述相关医学研讨成果共同。
测验机制是PPD法和PEGME法差异的本源，PPD法对HDL-C进行检测的途径为将聚阴离子对超低密度酯蛋白（VLDL）及LDL-C的吸附效果充分利用起来，一起将表面活性剂溶解有利HDL-C的效果充分利用起来。可是，该办法本真无法将反响酶系触摸LDL-C引发的显着副效果从根本上消除去[10]。而PEGME规律对这一问题进行了较好的处理，一方面LDL-C遭到了硫酸α-环糊精等的有用遮盖，另一方面大分子LDL-C复合物触摸酶的现象在润饰酶中PEG润饰剂构成的空间妨碍的效果下得到了有用防止[11]。在点评HDL-C自动化测定试剂的过程中应该至少从以下两个方面调查：①对HDL-C具有快速彻底的反响；②很少效果于或不效果于LDL-C等组分，成果的精确性和非特异性反响操控的严厉性成显着的正相关[12]。鉴定过程中应该对使用复合规范的现象进行有用的防止，将遭到非特异性反响的影响程度减轻到最低极限，从而将标本状况客观反映出来，对成果假性增高或下降现象的发作进行有用的防止[13-18]。从总体上来说，国内关于有用提高HDL-C自动化测定的相关研讨尚少，多为低水平的重复或对进口种类的依靠，因而对一些至关重要的根底研讨工作进行积极开展极为必要和重要，如脂蛋白各组分解离对表面活性剂的影响、脂蛋白亚组分开释遭到缓冲液离子强度改变的影响等，只要这样才干有用提高研讨水平，实在有用地确保试剂质量[19]。
综上所述，HDL-C的查验中PEGME法优于PPD法，临床实验室应慎重使用PPD法，值得临床注重。
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